请问用缓冲液乙醇乙醚洗涤酪蛋白封闭液浓度沉淀的目的是什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2022-10-27 11:14 标签： 酪蛋白封闭液浓度

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1、酪蛋白的制备,一、实验目的 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法,二、实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7 利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来 用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白 离心技术是物质分离的一个重要手段，它是利用物质在离心力的作用下，按其沉降系数不同而分离 离心机可分为工业用离心机和实验用离心机，实验用离心机又可分为制备性离心机和分析性离心机 制备性离心机分为三类：普通离心机，高速冷冻离心机和超速离心机,离心机使用注意点： 使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平

2、衡离心管和其内容物，平衡时重量之差不得超过离心机说明书上所规定的范围 离心机的转头中绝对不能装载单数的离心管，当转头只是部分装载时，离心管必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围 离心管中装载溶液时，根据待离心液体的性质和体积选用适合的离心管 若要在低于室温的温度下离心时，转头在使用前应放置在冰箱或置于离心机的转头室内预冷 离心机在运行过程中，操作人员不得随意离开，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障 每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，不得过速使用,三、实验器材 离心机 精密pH试纸 温度计 电炉 布氏漏斗及抽滤瓶,四、实验

3、材料与试剂 牛奶 95乙醇 无水乙醚 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 乙醇-乙醚混合液,五、实验操作 将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40 将20mL牛奶加热至40，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液 用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液 待悬浮液冷却至室温，3000rpm离心15min，弃上清，得酪蛋白粗制品 用6mL水洗脱沉淀1次，3000rpm离心10min，弃上清 在沉淀中加入6mL95乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤 用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀1次，最后用乙醚洗涤沉淀1次，抽干 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品 准确

※实验一（1）糖的颜色反应

1. 掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。

2. 掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。

1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。

2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。

实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。

莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。

于4支试管中，分别加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1 ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5 ml（切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。

于4支试管中，分别加入0.5 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式试剂2.5ml，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。

【实验现象观察并记录】

仔细观察实验中的颜色变化，对于塞式试验和杜式试验还需记录下颜色变化的时间。

一、实验名称：从牛奶中分离酪蛋白

1.学习从胶体中提取某一类物质的方法。

2.学习蛋白质的各种颜色反应及其原理。

1.蛋白质是两性化合物，溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。当调节牛奶

的pH值达到酪蛋白的等电点（pl）4.8左右时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电

中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会以沉淀形式从牛奶中析出。

2.缩二脲反应原理：具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生

成红紫色的络合物。所有的蛋白质均有此显色反应。

3.蛋白黄色反应原理：硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化，在加热状态下产生了黄色硝

基苯衍生物，再加碱颜色加深呈橙黄色。这是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸

和色氨酸的蛋白质所特有的颜色反应。

4.茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的

缩合物。此反应为一切氨基酸及α-氨基酸所共有。

1.取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌

边加稀醋酸（1：9）溶液约2mL——有白色沉淀析出。

2.继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心

3.离心完毕后，上清液倒入乳糖回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）搅匀，然后用

布氏漏斗减压过滤，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗涤沉淀2次，每次约10ml，最

后用5ml乙醚洗涤沉淀一次，减压过滤至干——得到干燥的白色固体。

4.将干粉铺于表面皿上，称量并计算牛奶中酪蛋白含量。

5.称取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氢氧化钠溶液的生理盐水（5mL）中，然后滴加3-4

滴1%硫酸铜溶液，振荡试管——溶液变成紫色。

表面皿与酪蛋白的总质量m1 =31.78g

1.牛奶是一种胶体，在正常情况下是均一稳定的，要想分离出其中的某一成分，就应

该想办法使这种成分变成沉淀析出。通过本次实验，我知道了可以通过调节胶体的

酸碱性，来改变蛋白质分子所带电荷，使其达到等电点。此时蛋白质分子间的电荷

作用力最小，分子间没有了间隙，浮力减小，蛋白质就会沉淀。而实验中50ml牛

奶和2ml稀醋酸（1：9）所配成的混合液的pH恰好在4.8左右，正好是蛋白质的

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