【摘要】: 目的:研究ADAMTS-5在退变的腰椎间盘髓核组织中的表达,探讨其对腰椎间盘退变的影响。 方法:①实验组:退变的腰椎间盘髓核组织,取自2009年3月至2009年9月期间在福建省立医院骨二科住院手术的腰椎间盘突出症患者行手术摘除的髓核标本,共30例(男15例,女15例),平均年龄40.58(24~63)岁。②对照组:外伤性腰椎骨折患者的腰椎间盘髓核组织,取自同期在福建省立医院骨二科住院手术的腰椎骨折,共28例(男18例,女10例),年龄13~22岁,平均(15.25±1.54)岁。所有标本分别制作为石蜡和冰冻切片,用HE染色法对两组髓核标本进行组织形态学比较,免疫组织化学研究ADAMTS-5在实验组和对照组中的表达情况。 结果:1、HE染色组织学观察在退变间盘中,各标本均表现出一定的退变特征,髓核细胞空泡化,出现肥大软骨细胞巨克隆,呈现出软骨细胞的“巢状”结构,软骨样软骨细胞外周胶原纤维排列混乱。2、免疫组织化学S-P法检测椎间盘细胞ADAMTS-5的蛋白表达,在对照组中,多数样本ADAMTS-5阳性细胞率低;在退变间盘中,多数样本ADAMTS-5阳性率较高,结果以?x±s表示,计量资料比较采用x2检验分析证实组间差异有统计学意义P(0.05) 结论:蛋白水解酶ADAMTS-5在退变椎间盘高表达,其可能参与蛋白多糖的降解,从而引起椎间盘细胞外基质失衡,最终导致椎间盘退变;通过对ADAMTS-5的研究,为今后在分子生物水平上治疗椎间盘退变的治疗提供参考。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位授予年份】:2010
支持CAJ、PDF文件格式
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tissue,MALT)淋巴瘤的危险因素。甲硝唑因其在胃部的高稳定性及高活性而成为根除Hp的首选药物之一,而Hp对甲硝唑的耐药问题正日益突出,已成为根治失败的主要原因。 临床上Hp的分离、培养是较困难而复杂的工作,从而导致Hp的药敏试验很难在临床广泛开展。有必要深入了解Hp的耐药机制,在此基础上运用分子生物学的方法进行药敏试验,指导临床用药;同时也为耐药性逆转的研究打下基础。 Hp对甲硝唑耐药的机制尚未明确,目前认为可能与以下因素有关:①硝基还原酶活性的降低;②细菌代谢状态及酶系统的变化;③药物摄入减少或外排增加;④DNA的修复能力增加;⑤氧清除能力增加,无效循环增加。Goodwin等报道Hp对甲硝唑耐药的分子机制主要是由于编码氧不敏感NADPH硝基还原酶的rdxA基因的突变失活。另外也可能与编码氧敏感硝基还原酶的fdxB和frxA基因及编码DNA修复酶的recA基因等的突变相关。近年来,国内外学者已经克隆到一些耐药相关基因,如rdxA、fdxB、frxA、recA等,但这些尚不能完全解释Hp对甲硝唑的耐药现象,是否存在其他耐药相关基因及耐药机制有待进一步研究。 接分离差异基因,是筛选耐药基因的有效手段。本实验首次运用SSH技术筛选 对甲硝哇耐药和敏感的Hp菌株间的差异表达基因片段,并对所获差异片段进行 克隆、特异性鉴定、测序及同源比较,以期寻找与耐药相关的基因片段,为耐药 机制的进一步阐明打下基础。 实验方法 1.幽门娜杆苗的分离培养所有Hp临床菌株均分离自胃粘膜活检标本。Hp标 准株NCTC 1 1 637由浙江大学病原生物学教研室保存并提供。病人胃粘膜组织匀 交分别以5株耐药菌为被检菌,1株敏感菌为参考菌进行。整个差减杂交实验流 程如下:将酶切后的被检菌DNA均分成两份,一份与接头1连接,另一份与 接头ZR连接;然后将过量的酶切后参考菌DNA分别加入2个连有不同接头的 被检菌DNA反应管中,98℃变性1 .5 5.SSH产物的克隆和鉴定将第2次PCR扩增的目的片段用35 PCR产物纯化 试剂盒进行纯化,然后克隆至pUcm一T载体中,转化于E.coh DHS。株进行扩 增及蓝白筛选。随机挑选120个白色菌落扩增后用碱变性法提取质粒,再以质 粒DNA为模板,以两接头内侧的巢式引物进行PCR扩增鉴定有无插入片段及 片段大小。 6.斑点杂交将PCR扩增的差异DNA片段纯化浓缩、变性后点制到尼龙膜上, 点制8张尼龙膜,经80℃烘箱烘烤Zh后保存、备用。取实验株以外的耐药和敏
【学位授予单位】:浙江大学
【学位授予年份】:2004