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[求助]求助pc12细胞的分化问题??
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这个帖子发布于11年零292天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。 我做一种神经营养因子的 功能的测定,是不是用未分化的pc12细胞?这里的未分化和分化各是什么意思?是指它的 恶性程度吗?我是新手,请教各位???
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分化的是有突起的就想神经原的样子未分化的就是一个小圆点你做神经营养的应该用分化的
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我觉的应该用未分化的pc12细胞吗?因为蛋白的预期的目的是要使pc12细胞向神经方向分化,如果我用了分化的pc12细胞,最后的
定论就不好下了,到底是不是我蛋白的作用促使它长起突起了还是它本身的突起呢?请教各位高手,我分析的 对吗??
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用分化的是因为它有分化的趋势加入NGF后可以刺激生长,就象神经原细胞
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w100yg wrote:pc12细胞分化是目前比较成熟的研究NGF对于神经元生长的模型。但是对于pc12细胞分化的指标判断一般是其突起长度大于胞体直径的二倍，作为判断标准，一般用胎牛和马血清培养时也会有很短的突起，但不能说此时细胞已经分化，可以登陆查看pc12 是什么状态。
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丁香园准中级站友
转贴wangpengljr ：培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中,置于ＣＯ2培养箱(37℃,95%空气5%ＣＯ2),培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4,高糖),加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形,直径15～20μｍ,也有椭圆或多角形的,扁平的细胞少见,倾向于聚集成小团簇状(A图)。分化后:加入ＮＧＦ后的24ｈ内细胞停止分裂,长出似交感神经元样的突起;第4～14ｄ,细胞体积增大,突起增多并增长,形成网络,数周后,突起可长达500～1000μｍ(B图)。NGF可促进PC12细胞向类似交感神经元样的形态分化,最终导致PC12细胞在生理、生化方面都具有神经元样的功能
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丁香园准中级站友
有细胞照片
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请问上面的高手: 我现在正在做一个基因表达蛋白的功能,文献上说它能促进神经突起和轴突的生长,我的细胞模型是pc12细胞,我买的 是未分化的 pc12细胞,目的是想在加入我的目的蛋白后,它能使pc12向神经分化长出突起,我们的想法对吗?
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请问上面的高手: 我现在正在做一个基因表达蛋白的功能,文献上说它能促进神经突起和轴突的生长,我的细胞模型是pc12细胞,我买的 是未分化的 pc12细胞,目的是想在加入我的目的蛋白后,它能使pc12向神经分化长出突起,我们的想法对吗?
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丁香园准中级站友
tangjuan 请问上面的高手: 我现在正在做一个基因表达蛋白的功能,文献上说它能促进神经突起和轴突的生长,我的细胞模型是pc12细胞,我买的 是未分化的 pc12细胞,目的是想在加入我的目的蛋白后,它能使pc12向神经分化长出突起,我们的想法对吗?我觉得你的实验可以分两步：（1）在未分化的PC12中，加入你所要用的蛋白，看是否可以促进细胞的分化；（2）在已经分化的PC12细胞中（比如经NGF诱导），加入目的蛋白，看是否可以促经其突起生长；
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如果做神经生长模型是不是必须选择分化的细胞，加入我的目的蛋白质后，他会长出突起，但是分化的细胞本来就有突起，假如我的蛋白后，并不能说明问题。长出的突起并不能说明是我的蛋白的功能．我好困惑，我的蛋白具有促使神经突其生长的功能，但文献报道没有促神经分化的功能。我到底用哪种分化还是未分化的呢？我是新手，对这方面的知识了解不多！！能否给予我清楚的解释！！！
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we often employ rat pheochromocytoma (PC12) cells instead of neurons, because PC12 cells can be passaged and cultivation is convenient. What is more important, these cells resemble neurons in many respects. They express voltage-sensitive ion channels and have functional intracellular transduction systems such as inositol triphosphate and cyclic AMP (Isom and Borowitz, 1993).而且我们也用分化了的PC12细胞检测神经营养因子，如果有神经生长因子释放，细胞活力等指标都会上升，个人认为如果用是否分化来判断神经生长因子的作用，感觉比较困难，因为（1）分化需要过程，不是短期就能明显检测到；（2）是否分化感觉是定性，不能定量。个人意见，大家交流。
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谢谢上面的高手,你的建议是让我用分化的pc12细胞,可我买了未分化的细胞怎么办??谁有分化的pc12细胞,能否相送,或者我也可以购买!!!
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tangjuan 谢谢上面的高手,你的建议是让我用分化的pc12细胞,可我买了未分化的细胞怎么办??谁有分化的pc12细胞,能否相送,或者我也可以购买!!!北京的吗？
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关于丁香园关注今日：7 | 主题：118680
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【求助】PC12细胞类型的选择及培养方案的一点设想
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这个帖子发布于6年零190天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
研究目的：药物对氧化损伤后PC12细胞的影响三点疑问:（1）通过查询中科院上海所细胞库及园内相关的帖子了解PC12细胞有三种类型：未分化型，低分化型，高分化型。细胞#生理特性：加入ＮＧＦ后的24ｈ内细胞停止分裂,长出似交感神经元样的突起;第4～14ｄ,细胞体积增大,突起增多并增长,形成网络,数周后,突起可长达500～1000μｍ；分化的PC12细胞不可以传代？完全分化的PC12细胞停止增殖传代，NGF刺激的24－48h后，细胞可以消化下来传代或者冻存，用于继续培养。一般这种细胞叫做NGF activated cells。细胞#自己的构想方案：（1）可以购买PC12细胞未分化型用于增殖传代，待细胞数量到底自己的实验要求，进行分批诱导分化为不同分化程度的PC12细胞。这样的优点：可以获得大量的PC12细胞（有源）；缺点：需要购买NGF进行诱导分化（花钱）；（2）直接购买低分化型PC12细胞，既可以传代，又无需要加入NGF诱导，而且在传代的过程中也许分化程度慢慢提高，有利于神经突生长研究，一举三得？（3）直接购买PC12高分化型，直接拿来做神经突观察，但因为高分化，虽然不是绝对的完全分化，会因为增殖能力差，也许需要大量的高分化PC12细胞。（同原代细胞一样烧钱）。（4）以上全是多想乱想。小结：综上还是选用低分化的PC12细胞？？希望又经验的战友老师指正，细胞选对了，既节约钱又有科学性，成功了第一步！！（2）培养基的问题未分化与低分化的PC12一般用DMEM(或者1640)+5%FBS+10%HS；高分化PC12只要用DMEM+10%FBS就可以. PC12细胞的高分化型很好养细胞#而中科院上海所细胞库提高低分化和高分化均为DMEM+10%FBS;未分化用1640++5%FBS+10%HS基本上针对不同分化类型的PC12细胞用不同的培养基这个问题得到共识。（3）诱导PC12细胞的培养基这是我看文献遇到最大的问题，也是本次体外的核心问题。在一个实验中，PC12细胞的培养基居然有多种，归结起来这可能与要诱导PC12细胞和根据不同的试验设计有不同的要求有关，但是没有一个合理的介绍和使用介绍。论坛里有相关的提问：国内文献中都没有具体说用NGF诱导PC12分化是培养基的成分。国外文献报道用DMDM+1%FBS or 1%HS，我们这样试过，发现细胞不用加NGF就可以分化小结：虽然不想通过先加入NGF诱导得到活得长出神经突的分化型的PC12细胞，但是想弄明白使用含低浓度血清培养基的作用，还有大胆的设想，是否可以通过使用ATCC推荐使用的完全培养基培养获得大量未分化型的PC12细胞后，自行通过去掉马血清或者改变胎牛血清浓度诱导未分化性PC12细胞分化用于神经突生长研究？以上全是纸上谈兵，希望有实战经验的老师们提出宝贵的意见，万分感谢！！
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skyskytotop 编辑于
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非常感谢楼主建立这个贴供大家讨论。本人计划养PC12细胞，现在还是一头雾水。首先，关于做神经损伤的保护作用，如何选PC12细胞分化型的问题，本人系统检索了PUBMED数据库，发现使用高分化细胞的绝大多数论文是亚洲，尤其是中国学者，发表期刊的影响因子也相对较较低。在检索的几篇高因子论文（Nature, PNAS等）中，用的细胞都需要先用NGF诱导分化后，才进行相关实验的。因此，可以推测国内目前使用的大多数PC12细胞均为高分化的，且其可接受度在欧美学界尚存在着不确定性。那么进一步分析，欧美学者用的是什么细胞呢，我想肯定不是高分化的。目前ATCC库中PC12细胞只有两个货号，一个是CRL-1721（用1640养），另一个是CRL-1721.1（Adherent型，用F12养），均表明可用NGF诱导出神经表型，但均未说明到底是低分化或未分化的。ATCC提供的照片我也附在下面，请养过PC12的同志们鉴定一下，对应中科院细胞库应该是哪种细胞。其次，有关中科院细胞库的三种分化型PC12细胞，很头痛。三种分化之前的区别，尤其是低分化与未分化细胞之间应该选哪个，也没有搞明白。中科院细胞库位于中科院上海分院的神经所里。是不是他们哪个课题组把从ATCC买来的细胞进行某种处理后形成的？
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2.5S是NGF的β亚单位，是NGF的活性部位。7S是完整的NGF，由两个α亚单位，β亚单位和两个γ亚单位组成的，完整的NGF复合体的沉降系数是7S,而β亚单位的沉降系数为2.5S。β亚单位是NGF生物学效应的活性部分，而γ亚单位是肽酶，有促进β亚单位成熟的作用。α亚单位的作用尚不清楚。如果想省钱的话，买临床上用的金路捷针就可以，一样用
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希望各位版主，战友发表下经验，你们的建议就是我成功的开端！
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神经生物版就欢迎这样的讨论。自己拿出方案，引用多方面文献，供大家参考，引起大家的参与。这才是我们鼓励的。而不是简简单单地问一句“大家好，请问蔗糖饮水怎么做？”、“怎么养小胶质细胞？”。我一般不会理睬这种问题，顶多回答：“用大鼠做”，“在细胞间养”。做科研一定要有自己的思考。别人嚼烂喂给你吃的，叫食糜，是糜烂的糜。非常鼓励“”战友的问题，特别加分3分鼓励！
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我没有养过细胞，所以无法给你回答，希望其他战友积极参与讨论～
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谢谢甲醛版主的鼓励，因为老板严格的缘故，不轻易的让学生开始做实验，看了很多文献，设计了不同的课题。现在真正要动手去做，就发现许多问题。简单的想证明一个药物有效，虽然只是表面的一句话，用到细胞上，可能就要设计建立一个有效稳定的评价模型，筛选药物浓度，确定观察时间点，这样就不是简单的细胞培养了。而文献又不会详细的告诉你，设计一个科学的方案，难呀！牢骚这么多，希望战友帮助！
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2011大爱无疆 编辑于
甲醛 神经生物版就欢迎这样的讨论。自己拿出方案，引用多方面文献，供大家参考，引起大家的参与。这才是我们鼓励的。而不是简简单单地问一句“大家好，请问蔗糖饮水怎么做？”、“怎么养小胶质细胞？”。我一般不会理睬这种问题，顶多回答：“用大鼠做”，“在细胞间养”。做科研一定要有自己的思考。别人嚼烂喂给你吃的，叫食糜，是糜烂的糜。非常鼓励“”战友的问题，特别加分3分鼓励！也许大家都比较忙，没时间看我的帖子求助！但又急切的希望有经验的战友提供好的建议！我有个低级的问题问甲醛版主，我可以将此贴重新发到细胞培养版吗？貌似有点一稿两投不道德。
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2011大爱无疆 也许大家都比较忙，没时间看我的帖子求助！但又急切的希望有经验的战友提供好的建议！我有个低级的问题问甲醛版主，我可以将此贴重新发到细胞培养版吗？貌似有点一稿两投不道德。发吧，毕竟那里做细胞的专业人士更多～
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直接上原代，要是时间和钱够
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holywater 直接上原代，要是时间和钱够谢谢你的建议，这就是选择PC12细胞的原因。
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战友您好有幸和战友的研究方向十分相似我的研究目的是药物对PC12细胞的毒理研究方法准备采用未分化型的PC12细胞NGF诱导，遇到了和你很相似的问题前期文献调研中，多使用undifferentiated state的细胞Silver Impairs Neurodevelopment: Studies in PC12 Cells也有不诱导直接用的，如Cell permeable ROS scavengers, Tiron and Tempol, rescue PC12 cell death caused by pyrogallol or hypoxia/reoxygenation然而未分化型的PC12诱导成神经元表型的时间几乎和原代培养的一样长目前也很矛盾附件是上面提到的文献希望得到大家的指导
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wangjieting 战友您好有幸和战友的研究方向十分相似我的研究目的是药物对PC12细胞的毒理研究方法准备采用未分化型的PC12细胞NGF诱导，遇到了和你很相似的问题前期文献调研中，多使用undifferentiated state的细胞Silver Impairs Neurodevelopment: Studies in PC12 Cells也有不诱导直接用的，如Cell permeable ROS scavengers, Tiron and Tempol, rescue PC12 cell death caused by pyrogallol or hypoxia/reoxygenation然而未分化型的PC12诱导成神经元表型的时间几乎和原代培养的一样长目前也很矛盾附件是上面提到的文献希望得到大我的理解：选择何种类型的细胞跟研究目的密切有关你主要做毒理学的研究，应该重点观察细胞存活情况，因此我认为完全可以选未分化型的！然而未分化型的PC12诱导成神经元表型的时间几乎和原代培养的一样长——这句话没有理解.
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那样的话文章投不了几分了2011大爱无疆 谢谢你的建议，这就是选择PC12细胞的原因。
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同意，但是我们也要量力而行，根据自身的条件，用最优化的方案解决问题也不为上佳的选择！继续求助大家谈谈你们培养PC12的经验！
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我要做Aβ对PC12细胞的凋亡，是不是选择未分化的呢？
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mengjia 我要做Aβ对PC12细胞的凋亡，是不是选择未分化的呢？应该选用完全分化的，结构和生化更接近神经元的特点
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2011大爱无疆 应该选用完全分化的，结构和生化更接近神经元的特点完全分化是高分化的吗?低分化和高分化有什么区别吗？
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mengjia 完全分化是高分化的吗?低分化和高分化有什么区别吗？我的意思表达欠准确，应该是高分化的更具有类似神经元的结构和功能。至于高分化和低分化的区别，我不能肯定答复，无文献支持。理解与诱导分化的程度有关吧，不同的实验要求可能有细微的差别而已，待验证！
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谢谢各位战友，受益匪浅。
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2011大爱无疆 我的意思表达欠准确，应该是高分化的更具有类似神经元的结构和功能。至于高分化和低分化的区别，我不能肯定答复，无文献支持。理解与诱导分化的程度有关吧，不同的实验要求可能有细微的差别而已，待验证！版主上面说用分化的更好，但是前面一个有关药物对PC12细胞毒理作用的帖子又说未分化好，其实他们都是差不多，最终都要用到人身上，我觉得是不是还是低分化的更接近实际，
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貌似明白了一点，用未分化的还是分化的，还是要看你做的实验当中的重点是什么，如果你仅仅测存活或者凋亡率，而不牵扯到细胞形态的观察的话，那用未分化的和分化的都无大碍，但是要是你的实验中需要观察PC12细胞的一些形态特征，比如说需要扫描电镜观察突触数目及神经突触超微结构，以及免疫荧光检测细胞突触素和突触蛋白的表达，应该就用低分化或者高分化的，因为只有分化的PC12细胞才有神经细胞形态，才能表达突触蛋白，不知道对不对，求教！
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zhangyaozhyx 貌似明白了一点，用未分化的还是分化的，还是要看你做的实验当中的重点是什么，如果你仅仅测存活或者凋亡率，而不牵扯到细胞形态的观察的话，那用未分化的和分化的都无大碍，但是要是你的实验中需要观察PC12细胞的一些形态特征，比如说需要扫描电镜观察突触数目及神经突触超微结构，以及免疫荧光检测细胞突触素和突触蛋白的表达，应该就用低分化或者高分化的，因为只有分化的PC12细胞才有神经细胞形态，才能表达突触蛋白，不知道对不对，求教！求教不敢当，但同意你的观点！很多文献都没有明确说明PC12细胞的分化型，也缺乏这方面的讨论，原因何在？不知！
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的确，看了好多都没写，但是估计也是默认了，有形态学的实验内容估计就是分化形的了，但低分化和高分化怎么分不知道，是不是不太好分，或者在长得时候细胞也在随时分化中，你现在用的是低分化的还是高分化的？细胞好养吗？我刚开始养这个细胞，感觉未分化的长得很慢，
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高分化很好养
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2011大爱无疆 高分化很好养我最近也要买细胞了，前面试着养了未分化的细胞不太好养，低分化的还行吧，现在想买高分化细胞，不知道你养高分化细胞中有没有出现什么问题，比如说细胞增值慢或者传代慢的情况，有没有因为细胞是高分化导致细胞传几代后就增值能力下降的现象？多谢！
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zhangyaozhyx 分化导致细胞传几代后就增值能力下降的现象？多谢！纯属多虑！放心吧！祝你成功！
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本人做过几年的PC12细胞，也有很多的困惑，很多发表的文章对于选择分化还是未分化的PC12描述的并不明确，但是我认为在做神经保护的实验中，还是要选择未分化PC12，经NGF分化后进行实验，即使是测定细胞的存活率或则凋亡，如果未经分化，只是一种瘤细胞而已，并不具有神经元的特性。不知道我说的对不对?
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fenzishengwushi 本人做过几年的PC12细胞，也有很多的困惑，很多发表的文章对于选择分化还是未分化的PC12描述的并不明确，但是我认为在做神经保护的实验中，还是要选择未分化PC12，经NGF分化后进行实验，即使是测定细胞的存活率或则凋亡，如果未经分化，只是一种瘤细胞而已，并不具有神经元的特性。不知道我说的对不对?同意，能否谈谈未分化PC12细胞经NGF诱导分化培养的经验。诱导前后细胞的形态变化，如果判断诱导成功！
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本人也做类似的研究啊
用的不知道是分化的，还是未分化的细胞。 细胞太多呈梭形，圆形较少，长的挺快了，2天就要传代，大部分都有细胞突起。开始用10%胎牛血清+DMEM，后来改用5%胎牛血清+10%马血清+DMEM，发现差异不大。3个多月以来，发现药物对细胞的作用 毫无规律，极少能够促进PC细胞细胞的增殖。问题是 MTT结果不稳定，用H2O2做损伤模型，一直不出来，请教各位大侠，是否可以指点指点！
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2011大爱无疆 纯属多虑！放心吧！祝你成功！我也一直认为细胞养太久了
失效了一直在考虑 是否要重新购买一个细胞株 试一试
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luckydog0712 本人也做类似的研究啊
用的不知道是分化的，还是未分化的细胞。 细胞太多呈梭形，圆形较少，长的挺快了，2天就要传代，大部分都有细胞突起。开始用10%胎牛血清+DMEM，后来改用5%胎牛血清+10%马血清+DMEM，发现差异不大。3个多月以来，发现药物对细胞的作用 毫无规律，极少能够促进PC细胞细胞的增殖。问题是 MTT结果不稳定，用H2O2做损伤模型，一直不出来，请教各位大侠，是否可以指点指点！
根据你的描述，感觉应该是分化的，至于是低分还是高分则要看图。我养的是高分化的，如果传代密度在<font style="color:#x <font style="color:#5左右，基本两天是可以传代的。如果你想长慢点，可以适当降低细胞密度。
不知道你有没有先做H2O2对PC-12细胞的剂量和时间效应，找到损伤大概在30%—50%左右的一个浓度和时间，在接下去做药物的增值。
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根据你的描述，感觉应该是分化的，至于是低分还是高分则要看图。我养的是高分化的，如果传代密度在<font style="color:#x <font style="color:#5左右，基本两天是可以传代的。如果你想长慢点，可以适当降低细胞密度。
不知道你有没有先做H2O2对PC-12细胞的剂量和时间效应，找到损伤大概在30%—50%左右的一个浓度和时间，在接下去做药物的增值。谢谢你的提示。我要做H2O2对PC-12细胞的剂量和时间效应，就是每次96孔板做MTT时，H2O2 作用效果差，摸不出线性关系。我个人也感觉是 高分化的细胞，导致药物没效了。正考虑重新购买低分化的细胞。请帮忙鉴定下我的细胞类型，谢谢！非常感谢！
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luckydog0712 谢谢你的提示。我要做H2O2对PC-12细胞的剂量和时间效应，就是每次96孔板做MTT时，H2O2 作用效果差，摸不出线性关系。我个人也感觉是 高分化的细胞，导致药物没效了。正考虑重新购买低分化的细胞。请帮忙鉴定下我的细胞类型，谢谢！非常感谢！会不会是你的H2O2失效了，重新配下试试。感觉是高分化的，和我养的差不多。
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民间恺撒 会不会是你的H2O2失效了，重新配下试试。感觉是高分化的，和我养的差不多。H2O2 我都是现用现配的重新购买细胞株，请教下哪里购买的细胞较好？即低分化的PC12细胞
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国内的就中科院的，国外的ATCC，不过在国内买ATCC，要好好问清楚代理公司细胞的传代次数以及细胞状态等。
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养得真漂亮，高倍镜的瞧瞧！
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