间充质干细胞培养基有贵的,有便宜的,在效果上有很大的区别吗?

脐带间充质干细胞和胎盘亚全能干细胞在用途上有何区别?_百度宝宝知道人脐带来源间充质干细胞的免疫调节作用--《中国协和医科大学》2010年博士论文
人脐带来源间充质干细胞的免疫调节作用
【摘要】:
背景:间充质干细胞(Mesenchymal Stem cells, MSC)是一类具有自我更新(selfrenewal)和多向分化潜能(multi-lineage differentiation)的成体干细胞。它来源广泛,具有支持造血和多向分化功能;随着对MSC认识的不断加深,人们还发现MSC具有低免疫原性和较强的免疫调节功能。目前研究最多的主要是人骨髓来源的间充质干细胞(hBM-MSC).人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSC)由于其较人骨髓来源间充质干细胞更易于制备以及低风险病毒感染,并且脐带来源间充质干细胞易于体外培养及扩增等优势已经成为人骨髓来源间充质干细胞非常好的替代品。但是,人脐带来源间充质干细胞在免疫调节方面功能尚未有深入研究。
目的:研究人脐带来源间充质干细胞发挥免疫学效应的作用及发挥作用的机制。方法:人外周血单个核细胞由不同的刺激剂刺激后与人脐带来源间充质干细胞共培养,通过检测人外周血单个核细胞的增殖及IFN-γ分泌情况观察人脐带来源间充质干细胞免疫调节效应;用transwell培育板培养来研究间充质干细胞的免疫调节作用是否需要细胞直接接触;用各种抑制剂确定人脐带来源间充质干细胞发挥免疫学效应的因子机制;另外,通过流式检测人外周血单个核细胞Annexin-V的情况来观察人脐带来源间充质干细胞发挥效应的情况及相关机制。
结果:人脐带来源间充质干细胞能够有效有效抑制人外周血单个核细胞刺激后的增殖及IFN-γ的分泌;Transwell系统共培养结果显示此抑制效果不受细胞接触的影响,既是这种抑制作用主要通过因子发挥免疫效应;抑制剂试验排除了TGF-β,IDO和NO的可能,并确定了前列腺素E2(PGE2)是人脐带来源间充质干细胞发挥免疫学效应的介导因子;炎症因子IFN-γ和IL-1β能显著上调人脐带来源间充质干细胞PGE2的分泌;人脐带来源间充质干细胞能保护人外周血单个核细胞刺激后的凋亡发生,并且此保护效应也是通过分泌PGE2发挥的作用。
结论:人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSC)同样能够发挥很好的免疫调节作用,并且第一次发现这种细胞的免疫学效应主要是通过PGE2的分泌实现,这一机制对于将来人脐带来源间充质干细胞的临床应用提供了理论基础。
背景:一种最近受人关注的因子IL-17,作为适应性免疫应答系统的标志炎症因子,最初由一群新T细胞群‘Th17’产生。在最近几年的研究中取得了许多相关成果,包括Thl7细胞趋导分化的分子机制的统一标准。这些对于弄清Th17细胞在宿主防御和自身免疫中的作用有很大帮助。最近的研究证实由IL-17产生细胞激发的炎症是许多人类自身免疫病动物自身免疫病模型的发展和致病的中心环节。并且激活的IL-23/IL-17轴对于系统性红斑狼疮(SLE)病免疫炎症非常重要。间充质干细胞是一种多能干细胞,可以向中胚层来源组织分化并且从各种组织分离得到。MSCs已经被认为在免疫细胞上拥有非常广泛的免疫调节作用,对许多效应功能有调节作用。最近报道胎儿骨髓来源MSCs能够促进正常供者来源的IL-17分泌细胞的扩增。而脐带来源MSCs对于免疫细胞这一效应尚不清楚。
目的:本文主要研究脐带来源间充质干细胞(hUC-MSCs)对于来自于正常供者或者SLE患者T淋巴细胞的免疫调节效应作用,特别是对于Th17细胞。这样可以扩展我们对于MSCs免疫调节功能的理解以及其作为细胞依赖治疗免疫紊乱疾病的临床运用潜力提供更多见解。
方法:我们将hPBMCs(来自于健康供者和SLE病人)或者CD4+T(来自于健康供者)细胞与hUC-MSCs培养,并将这个培养体系称为共培养细胞。hPBMCs细胞由丝裂原PHA刺激,而CD4+T细胞由ati-CD3/CD28 Dynabeads刺激。①我们用实时定量PCR,酶联免疫吸附法对比建康供者或者SLE患者来源hPBMCs表达IL-17分泌的水平。并检测加入另IL-6,PGE2和IL-1β中和试剂的IL-17表达改变。用酶联免疫吸附法和流式细胞仪检测CD4+T细胞在与hUC-MSCs作用后IL-17分泌表达量的改变。③IFN-γ和TGF-β的表达用酶联免疫吸附法检测,而Thl细胞和Treg细胞比例由流式细胞仪技术检测。④我们用酶联免疫吸附法比较健康供者和SLE患者IL-23的分泌水平改变。
结果:正常供者来源CD4+T细胞与脐带来源MSCs共培养比单纯培养正常供者CD4+T细胞能够产生高的IL-17分泌水平。相同的结果在正常供者PBMCs细胞中也得到证实。抑制试验证实这个效应可能部分是通过PGE2或者IL-1β介导产生的,并且IL-23不参与其中。接下来我们将hUC-MSCs与SLE患者来源PBMCs细胞共培养,体外诱导IL-17的能力,hUC-MSCs能够更促进SLE病人分泌,但是并不能影响IL-23的分泌。同时,hUC-MSCs降低了Thl细胞数量而增加Treg细胞数量。
结论:综上所述,我们的结果第一次报道了hUC-MSCs同时促进健康供者和SLE病人来源PBMCs产生IL-17。PGE2和IL-1β可能部分参与hUC-MSCs的这个促进作用。这个发现可能对于hUC-MSCs运用于SLE患者潜在致病作用提出观点。考虑到血清中IL-17含量与SLE患者疾病活性相关性,临床运用hUC-MSCs治疗SLE可能需要更多仔细的研究。
【学位授予单位】:中国协和医科大学【学位级别】:博士【学位授予年份】:2010【分类号】:R392
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【求助】脂肪干和脂肪间充质干细胞有什么区别?
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这个帖子发布于9年零150天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
现在看文献,有的写的是脂肪干细胞,有的说是脂肪间充质干细胞,特想请教一下,这两种细胞具体有什么区别,还是就是一种细胞的两种提法?谢谢喽:)
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关于名称的统一,看一下这段话:In common with many rapidly developing fields, a variety of names have been used to describe the plastic adherent cell population isolated from collagenase digests of adipose tissue. Each of the following terms has its merits: adiposederived stem/stromal cells (ASCs), adipose-derived adult stem (ADAS) cells, adipose-derived adult stromal cells, adipose-derived stromal cells (ADSCs), adipose stromal cells (ASCs), adipose mesenchymal stem cells (AdMSCs), lipoblast, pericyte, preadipocyte, and processed lipoaspirate (PLA) cells. Nevertheless, the different names lend confusion to the literature. To address this issue, the International Fat Applied Technology Society reached a consensus to adopt the term “adipose-derived stem cells” (ASCs) to identify the isolated, plastic-adherent, multipotent cell population. This review adheres to this nomenclature and advocates its use by others. Recognizing the validity of the term “stem cell” it is accepted that some investigators will use the acronym to mean “adipose-derived stromal cells.”因此,标准的叫法应该是“脂肪干细胞”,有些研究中也叫做“脂肪基质细胞”,当然缩写都是一样的:ASCs关于细胞的分离纯化,看一下这一段:They minced rat fat pads, washed extensively to remove contaminating hematopoietic cells, incubated the tissue fragments with collagenase, and centrifuged the digest, thereby separating the floating population of mature adipocytes from the pelleted stromal vascular fraction (SVF). The SVF consisted of a heterogeneous cell population, including circulating blood cells, fibroblasts, pericytes, and endothelial cells as well as “preadipocytes” or adipocyte progenitors.32–34 The final isolation step selected for the plastic adherent population within the SVF cells, which enriched for the “preadipocytes.”因此,通过贴壁筛选后,留下来的基本是具有多向分化能力的干细胞了。当然,和BMSCs相似,这种细胞依然是异质性的。楼主的问题,可能是在培养时血清条件不好或者细胞状态不好,重新培养,注意传代时间,可能会好一些。不要消化太久,状态好的话胰酶室温消化一分钟足够了以上英文文献来源:J.M. Gimble, A.J. Katz, B.A. Bunnell,2007.Adipose derived stem cells for regenerative medicine
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谢了,还想请教个问题,就是用胶原酶分离时,Ⅰ型和Ⅱ型有什么比较大的差别吗?
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