race电泳跑出来弥散状好了 可以过一会观察吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-12-14 09:06 标签： 跑电泳
做SDS-PAGE电泳时胶配好了，是当天就跑电泳还是放置几天再跑好啊？_百度知道
做SDS-PAGE电泳时胶配好了，是当天就跑电泳还是放置几天再跑好啊？
提问者采纳
一般当天跑而已 最多也就在冰箱放过两天 再久不知道有没有影响了
我还想问一下，5倍的电极缓冲液是用的时候稀释五倍吗？五倍的上样缓冲液呢？
电极缓冲液用的时候稀释上样缓冲液就是混到样品里 最终体积是该缓冲液的五倍 比如本来20的样品 你加5的缓冲液进去 这样最终体积25
就相当于稀释了5倍
提问者评价
懂啦！谢谢您的耐心回答！
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出门在外也不愁琼脂糖凝胶电泳没有跑出条带是怎么回事用1%的琼脂糖凝胶,70V左右的电压下电泳,肉眼可以看到DNA样和Marker的蓝色跑到了3分之2处,但在紫外灯下只有Marker跑出了条带,但不明显,DNA样完全没跑,只_百度作业帮
琼脂糖凝胶电泳没有跑出条带是怎么回事用1%的琼脂糖凝胶,70V左右的电压下电泳,肉眼可以看到DNA样和Marker的蓝色跑到了3分之2处,但在紫外灯下只有Marker跑出了条带,但不明显,DNA样完全没跑,只
琼脂糖凝胶电泳没有跑出条带是怎么回事用1%的琼脂糖凝胶,70V左右的电压下电泳,肉眼可以看到DNA样和Marker的蓝色跑到了3分之2处,但在紫外灯下只有Marker跑出了条带,但不明显,DNA样完全没跑,只在孔的地方有荧光
　　原因很简单.样品里的目的片段DNA量太少,所以没有检测到.
是这个原因吗？点样的孔那里是有荧光的
具体是什么样品？加样孔周围的荧光可能是基因组DNA。
cDNA用PCR扩出来的DNA
那就是PCR没做出来，加样孔周围是基因组DNA。
PCR变性退火什么的条件和之前一样扩出来过，这次加样量跟之前不同，没扩出来是这个原因吗
我只是根据电泳结果判断你的PCR失败，但是PCR失败的原因可能有很多，加样量只是其中之一。
那什么条件做电泳跑出的条带会很明显啊
你的问题并不是琼脂糖电泳没跑好。
我知道 但是我之前扩出了PCR电泳跑得也不是很好 之前出现的情况是marker条带都很清楚 但是DNA条带很模糊 荧光也很浅 当时用的是0.8%的琼脂糖 想知道怎么能让条带更清晰
　　只要marker很清楚，DNA胶本身就没问题。你的PCR产物不清楚，一是上样量不够，二是DNA样品可能有降解，不要反复冻融。
我的DNA样每次都是现用cDNA扩出来的 有可能是cDNA降解了吗？一般的上样量就是5，6微升吧？
上样量不是固定的，你可以根据自己的情况加多加少。
至于PCR，要不你换个Taq酶试试，可以用TAKARA的ExTaq试试。蛋白电泳遇到的问题 - 实验交流 - 生物秀
标题: 蛋白电泳遇到的问题
摘要: [蛋白电泳遇到的问题] 请教下:我在电泳时发现，刚开始电泳，样品突然从点样孔中下降了一大截，后面还拖着尾巴。我电压是80V，当时电流是35mA。但是后来慢慢跑好了，到分离胶时Marker还挺好的，另外还有少许样品从孔底端漏了出来，到两层胶交界形成一直线。我的胶放置了起码有三个小时应该凝固好了。后来我把胶拆开发现两块胶竟然厚薄不同，分离较比浓缩胶要厚一点，所以中间有小缝隙。我没有继续做下去，请大家帮我分析下原因，不甚感激 关键词:[蛋白电泳 电泳 点样 分离胶 浓缩胶]……
请教下:我在电泳时发现，刚开始电泳，样品突然从点样孔中下降了一大截，后面还拖着尾巴。我电压是80V，当时电流是35mA。但是后来慢慢跑好了，到分离胶时Marker还挺好的，另外还有少许样品从孔底端漏了出来，到两层胶交界形成一直线。我的胶放置了起码有三个小时应该凝固好了。后来我把胶拆开发现两块胶竟然厚薄不同，分离较比浓缩胶要厚一点，所以中间有小缝隙。我没有继续做下去，请大家帮我分析下原因，不甚感激
浓缩胶时可用60v 分离胶时用120v 试试看吧
我也遇到过这样的问题，你的胶与玻璃板之间产生的缝隙，加入的样品较多时就会漏下来了
楼主不妨把你配胶的整个过程写一下，比如你的分离胶用什么压的是水还是正丁醇？分离胶凝后有没有冲洗？浓缩胶灌好之后插梳子有没有问题？还有你的胶的配方。让大家看一下。两块胶厚薄不同的情况比较少见，你用的是那种系统？
我用的是碧云天公司凝胶配制盒12％分离胶6ml，5％浓缩胶3ml.用蒸馏水压的，灌制分离胶大约40分钟后将水倒掉，用滤纸吸干，没有再用水冲洗，因为我压的水比较多。插梳子没问题，拔之后孔还挺漂亮的。点样也没问题。我忘说一点了，当时我把胶放在4度冰箱3小时昨天我从新配制一块胶，常温过夜。12％分离胶5ml,5％浓缩胶4ml. 浓缩胶时电压用60v 分离胶时用120v 。仍然有两个孔样品下漏，转印时感觉两块胶还是厚度不同，
我也遇到过这样的问题，你的胶与玻璃板之间产生的缝隙，加入的样品较多时就会漏下来了这个原因可能性比较大，呵呵，所以做胶一定要小心。
重点排除制胶中混入气泡，重点排除加浓缩胶时，分离胶表面有未挥发干净的水存在。
根据这段时间做的经验，我觉得应该好好检查一下所用，看看试剂的PH和浓度对不对，比如Arc/Bis、APS等与胶的聚合有很大关系，有时候时间长的话并不能说明胶就聚合的很好，还要试剂不失效才行，还有就是在加水那一步动作要快而轻，防止气泡进去和胶面变形，加样的时候注意不要加到孔外了，这样也会引起孔道样品相连的，一般4度放三个小时影响不是很大的，有时候我们过夜效果也还可以的，以上是我的经验希望有所帮助
以前用过碧云天的东西，觉得质量不怎么样配胶的各种东西还是自己配的比较放心我配胶基本上都懒得排气泡，也没出什么问题
重点排除制胶中混入气泡，重点排除加浓缩胶时，分离胶表面有未挥发干净的水存在。同意，要吸干净水，如果水压的不平可以考虑换正丁醇试试。还有玻璃板也要洗干净
还是正丁醇比较好,用超净水洗3-5次,倒置5min,再洗干水就比较容易了.
你配胶的装置是哪厂家的？北京六一厂的还是Bio-Rad的？你要特别注意配胶模板的厚度（比如0.5mm/0.75mm/1mm/1.5mm）和梳子的厚度，这两种厚度要一致，这样你的分离胶和浓缩胶才不至于厚度不一，而且如果梳子的厚度大于分离胶厚度时，插梳子时会将两块制胶板给强行撑开，后果不言而喻。
谢谢lxd777我今天也开始想发现这方面的问题。因为我找实验室借的装置，一直没注意，打算明天去看看。梳子好像写的是1.5mm不过我今天用同样的电泳槽跑了一块胶，只点15微升的样品问题解决了。难道20微升还多了明天一定好好瞧瞧再次感谢
上样量能上到15微升还是20微升不仅取决于梳子高度也取决于凝胶的厚度，如果凝胶较薄的话是上不到20微升的。
1）．制 胶: ①按比例配制分离胶（单体：双体=29：1），缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中，再在液面上小心注入一层水或正丁醇，以阻止氧气进入凝胶溶液中，静置90min。②同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，以连续平稳的液流注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，静制90min以上以保证完全聚合。2）预电泳： 将聚合好的凝胶安置于电泳槽中，小心拔去梳子，加入电泳后低电压10-20V的预电泳20-30min。（目的是清除凝胶内的杂质， 疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通）。3）加 样： 预电泳后依次加入标准品和待分析样品。（加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品避免边缘效应。样品一般在1.0mm厚的胶 加样50-100ug/lane)。4）电 泳： 加样完毕，选择适当的电压进行电泳可。一般采用恒压浓缩胶50V，分离胶60V，电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳
我想,这是配胶的问题,梳子的规格和板子的规格请注意匹配,呵呵
多少孔的梳子，多厚的梳子，这两样决定了你加样的最大体积。
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