转化中加了lb在42度90秒有影响吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2021-07-10 09:05 标签： lb与n

我觉得影响不大你可以再开开接着摇，我经常克隆摇菌的时间都不是很长，要是感觉不放心再放里面摇没有问题。

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前天用两个重组质粒转化DH-5α感受态菌（新订鼎国的），昨天和今天去看菌液均未出现浑浊，郁闷到极点！:-(
现将步骤列出各位高手给我指点指点！拜托啦！
1）水浴箱温度设定为42度。
2）解冻质粒两个重组质粒都寄自国外。质粒A滴在滤纸上共2ug。剪一半浸于5ulTE内浓度应为1/5 ug/ul.没错吧？质粒B直接装在一小EP管内大约二三十微升。
3）用饭盒装一些冰块及冰霜
4）将两管感受态菌置于栤浴中，分别向菌液内加入质粒A 3.8ul,质粒B 2.5ul.
轻轻混匀冰浴3min。【根据鼎国的说明书5ul感受态细胞需25ng DNA。一管感受态2ul我去除5ul,只用15ul。则DNA 需75ng, 质粒A换算成體积为 3.75ul. 质粒B浓度没测姑且用2.5ul。】
5）42度热休克 9s（精确）后立即转移至冰浴中使细菌冷却三四分钟。 此过程没摇动管子
（两质粒均为AMP抗性）
7）取15ml离心管4支，各加入含AMP的LB培养液5ml采用梯度法，每种质粒所摇菌液分别加入15ul或2ul每种质粒摇两管。37度2rpm摇菌过夜。
昨天今天去看，菌液均清亮但管底有一些固体沉淀。不知什么原因:?):?):?)
会不会是感受态的问题？鼎国的DH-5α有用过的吗？转化过程中，加LB培养液之前就看箌感受态管内有絮状沉淀不知咋回事？:?):?):?):?)
以前用Top1菌转化都没问题呀！
各位xdjm帮帮忙啊！万分感谢！

    不知道邀请谁试试他们

  • 政治敏感、违法虛假信息

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