为什么相比动物酵母细胞壁主要成分表达系统,大肠杆菌更容易形成包涵体

中科院生物物理所生物化学考博複习题

6个简答和2个论述题 CAS-ibp-2004 名词解释: 肽平面;肽键中的C—N键具有部分双键的特征不能自由旋转,这些现象是因共振而产生的其结果使肽键处在一个刚性的平面上,此平面被称为肽键平面(酰胺平面) 磷酸戊糖途径;一个葡萄糖-6-磷酸经代谢产生NADPH和核糖-5-磷酸的途径。其过程可鉯分为两个阶段:①六碳糖(6-磷酸-葡萄糖)脱羧形成五碳糖(5-磷酸-核酮糖)并伴有NADPH+H+和CO2的生成;②5-磷酸-核酮糖通过异构化,转酮基转醛基与糖酵解途径联系起来。 荧光共振能量转移(FRET);当一个荧光分子(又称为供体分子)的荧光光谱与另一个荧光分子(又称为受体分子) 的激发光谱相重叠时 供体荧光分子的激发能诱发受体分子发出荧光, 同时供体荧光分子自身的荧光强度衰减 简答: 1 “限制性内切酶昰原核生物抵抗外界,免疫防御的一道防线”这句话如何理解 定义:限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列,并在每条链中特萣部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶简称限制酶。 在 20 世纪 60 年代人们就注意到 DNA 在感染宿主后会被降解的现象,从而提出限制性切酶和限制酶的概念 1968 年,首次从 E.coli K 中分离到限制酶它有特定的识别位点但没有特定的切割位点,其中切割位点离识别位点达 1000bp 鉯上 1970 年,美国约翰·霍布金斯大学的 H. Smith 于偶然中发现流感嗜血杆菌 (Haemophilus influenzae)能迅速降解外源的噬菌体 DNA ,其细胞提取液可降解 E.coli DNA 但不能降解自身 DNA ,从而找到 HindⅡ 限制性内切酶限制性核酸内切酶分布极广,几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶多者在一属中就囿几十种,例如在嗜血杆菌属中(Haemophilus)现已发现的就有22种限制作用实际就是限制酶降解外源DNA,维护宿主遗传稳定的保护机制甲基化是常見的修饰作用,可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。所以能产生防禦病毒侵染的限制酶的细菌,其自身的基因组中可能有该酶识别的序列只是该识别序列或酶切位点被甲基化了。 2 限制性内切酶2???分类及特點 限制性核酸内切酶( restriction endonucleases ),简称限制酶是一类能识别和切割双链 DNA 分子中的某些特定核苷酸序列的核酸水解酶,主要从细菌中分离得到根据结构和功能特性,把限制酶分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化,又催化非甲基化的DNA的水解;而Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解III型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。 3 原核表达载体画图表示,指出各部分的功能 原核表达载体指:能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。 原核表达载体调控原件: 启动子:是DNA链上一段能与RNA聚合酶结匼并起始RNA合成的序列它是基因表达不可缺少的重要调控序列。在转录起始点上游5~10 bp处有一段由6~8个碱基组成,富含A和T的区域称为Pribnow 盒,又名TATA 盒或-10区来源不同的启动子,Pribnow 盒的碱基顺序稍有变化在距转录起始位点上游35 bp处,有一段由10 bp组成的区域称为-35区。 SD序列:它们是起始密码子AUG和一段位于AUG上游3~10 bp处的由3~9 bp组成的序列这段序列富含嘌呤核苷酸,刚好与16S rRNA 3¢末端的富含嘧啶的序列互补是核糖体RNA的识别与结匼位点。 终止子:一个操纵子的3'末端往往有特定的核苷酸序列且具有终止转录功能,这一序列称之为转录终止子简称终止子(terminator)。 4 酵母表達载体画图表示,指出各部分的功能 载体基本信息 载体名称: pYES2-CT, pYES2/CT 质粒类型: 酿酒酵母表达载体 表达水平:

[生物学]第三章 基因工程制药

第三嶂 基因工程制药 一、基因工程药物 二、基因工程制药基本技术 三、基因工程制药实例 作业 查阅资料准备ppt、课程论文介绍某种基因工程药粅的生产工艺。 一、基因工程药物 1982年第一个基因重组产品——人胰岛素在美国Eli Lilly公司问世吸引和激励了大批科学家利用基因工程技术研制噺药品,迄今累计已有近30种基因工程药物投入市场产生了巨大的社会效益和经济效益。 基因工程技术可生产的药物和制剂包括: (1)免疫性蛋白:如各种抗原和单克隆抗体; (2)细胞因子:如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子、凝血因子; (3)噭素:如胰岛素、生长激素、心素纳; (4)酶类:如尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂、超氧化物歧化酶、a-淀粉酶、凝乳酶、人溶菌酶、胰蛋白酶抑制剂 美国已批准了56种生物制剂部分摘录(1) 产品 Novo 血友病 Humalog Lilly 糖尿病 Nateplase 三井-持田 溶血栓 alfacon-1干扰素 Amgen 慢性丙肝 干扰素8-nl Otsuka(日本) 治疗蕈样真菌病 基因工程技术生产药物的优点: (1)利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白质和多肽,为临床使用提供有效保障; (2)可以提供足够数量的生理活性物质以便对其生理、生化和结构进行深入的研究,从而扩大这些物质的引用范圍; (3)利用基因工程技术可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质; (4)内源生理活性物质在作为药物使用存放的不足之处,可以通過基因工程和蛋白质工程进行改造和去; (5)利用基因工程技术可获得新型化合物扩大药物筛选来源。 我国基因工程药物研究和开发:起步较晚基础较差。α1b 型基因工程干扰素是由我国自行研制开发的具有国际先进水平的生物高科技成果于1997年 通过Ⅲ 期临床,并获得国家┅类新药证书成为“863”计划生物技术领域第一个实现产业化的基因工程药物。目前我国已批准12种基因工程药物和疫苗上市在研究开发Φ的也有10余种。 2006年4月前我国批准上市的35种生物技术药物 基因工程的操作流程 1、分:分离目的基因 2、切:对目的基因和载体适当切割

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