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编辑体核心蛋白MORFs的功能研究
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基于MBWCX及MALDITOFTOF MS技术的胃癌及结直肠癌血清肽组学初步研究.pdf 85页
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博士学位论文
基于MB-WCX及MALDI-TOF/TOF MS技术的胃癌及结直肠癌血清肽
组学初步研究
姓名：赵莲
申请学位级别：博士
专业：内科学
指导教师：沈守荣
博士学位论文
Carcinoma，
胃癌(GastricCarcinoma，GC)与结直肠癌(Colorectal
CRC)是威胁人类健康的几大常见恶性肿瘤之一，在我国有着较高的
发病率与死亡率。防治癌症措施中关键的一点在于防癌普查，以其尽
早发现肿瘤，治疗癌症。但是目前临床缺乏效果明确的无创性检查手
段，要确证肿瘤仍依赖内镜下病理活检。由于消化道肿瘤往往在癌症
初期缺乏典型症状，上述侵入性检查难以作为常规筛查手段进行普
及。因此，临床急需兼具灵敏度、特异性的非侵入性检查手段来弥补
这一欠缺。血液来源广泛，获取容易，血液检查对于民众而言耐受度
高，是最为理想的标本来源。血液肿瘤标志物的研究一直是肿瘤研究
领域的热点。但经过数十年的研究，目前仍只有甲胎蛋白(alpha
antigen，PSA)
等寥寥数种血清肿瘤标志物取得较为肯定的效果，而在消化道肿瘤方
面，癌胚抗原(Carcinoembryonic
19．9，CAl9．9)等均缺乏足够的灵敏度和特异性。
(carbohydrate
基于质谱技术的血清肽组学相关研究的发展为寻找新的消化道肿瘤
血清标志物开辟了新的道路。
l血清肽组学研究的方法学优化及偏倚研究
血清肽组包含大量的生理与疾病相关的信息，吸引着研究人员从
中寻找疾病相关多肽标记。高质量且表达稳定的血清多肽谱是血清肽
组学研究的基础。血清成分却极其复杂，会对其质谱分析产生负面
影响。因此选取合适的血清肽分离提纯方法很重要。此外，广泛的观
点认为血清肽组的组成和含量会在体外发生改变，这种改变其与外部
环境密切相关。这就涉及到与临床及分析化学、质谱仪，样本处理和
质谱分析有关的偏差，例如：血液采集管，凝血时间和温度，冻融次
数以及表面化学成分、质谱样本结晶以及激光强度都十分关键。此外，
谱对齐被认为是信号处理中最大的挑战。如果恰当的对齐，则所产生
的数据与那些基因表达分析所获得的数据就有了可比性，就可以运用
现有的软件包进行分析。另外，我们想弄清楚，如性别、年龄等人口
统计学参数差异到底对那些用我们的质谱平台绘制的血清多肽谱有
博士学位论文
些什么影响。在本研究中，我们比较分析了数种磁珠以及离心超滤
管对血清肽分离提纯的效力，以及在血清采集、预处理、质谱处理和
数据处理过程中的许多细节的影响，并对性别和年龄差异对血清肽组
的影响加以分析，揭示了基于弱阳离子磁珠多肽固相分离技术(weak
exchangemagnetic
飞行时间质谱(Matrix．AssistedDesorption／Ionization
Flight Spectrometry，MALDI．TOFMS)的血清肽组学研究中各种
非疾病变量对研究结果的影响。获得了研究所需的最佳的变量设置，
为血清肽组学研究提供依据。 本研究结果证明血清肽组学研究的每
一个步骤都需要进行严格规范。
2胃癌及结直肠
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大鼠长期二氮嗪预处理对心肌的保护效应影响及线粒体内膜蛋白蛋白质组学及研究.pdf 95页
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第三军医大学博士学位论文
大鼠长期二氮嗪预处理对心肌保护效应的影响及线粒体
内膜蛋白的蛋白质组学研究
心肌缺血预处理指短暂的缺血能显著减少后续长时间缺血引起的心肌损伤，目前
已经肯定预处理现象是普遍存在的：无论整体水平或细胞水平、无论在体或离体均存
在预处理现象，这一现象在包括人心肌细胞在内的许多种类细胞都存在i缺血预处理
是强有力的心肌保护方式，是内源性的对心肌缺血的预适应过程，经典的缺血预处理
在临床应用当中需要暂时阻断血流，并不能安全的适用于大多数的病人，为了弥补上
述不足，人们更加着眼于药物诱导缺血预处理的方法。90年代以来，线粒体中选择性
系，从发现至今，线粒体ATP敏感性钾通道已被证实与缺血预处理、凋亡和线粒体基
损伤，这为临床上采用药物来减轻心肌梗死患者的心肌细胞死亡找到了新的有效途径，
但是有文献报道，用特异性激动剂长时间激动腺苷受体、PKC等药物导致预处理信号
传递通路中的信号蛋白出现表达下调，引起缺血和药物预处理的心肌保护效应消失，
药物预处理在临床心肌保护的应用带来了新的问题。
DZ)长时间激动大鼠心肌，在
究采用MitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪(Diazoxide
ISO)心肌损伤模型上检测大鼠心肌线粒体呼吸功能、
大鼠异丙肾上腺素(Isoprenaline
大鼠心肌保护效应的变化，在此基础上提取线粒体内膜蛋白，应用二维荧光差异凝胶
白，探讨长期二氮嗪预处理心肌保护效应消失的机制。主要结果和结论如下：
第三军医大学博士学位论文
损伤作用。给大鼠连续腹腔注射DZ(20
保护效应，抵抗ISO引起的心肌缺血损伤，减轻心肌组织结构损伤的病理改变，
应与开放MitoKATP通道有关。
2．连续腹腔注射Dz(20
失，线粒体呼吸功能明显抑制， cTnI大量释放，证明大鼠长期二氮嗪预处理可以导
致二氮嗪对心肌的保护效应消失。
白表达均无明显改变。说明其作用机制可能心肌细胞膜KATP通道开放无关。
4．在大鼠长期二氮嗪预处理心肌保护效应消失模型基础上采用二维荧光差异凝胶
电泳技术筛选出差异表达的15个蛋白质点，采用质谱技术鉴定了其中的8个蛋白质。
原酶、线粒体ATP合酶d亚单位、电子传递黄素蛋白一辅酶Q氧化还原酶、抑制素、
线粒体ATP合酶B链，这些表达下调的蛋白都位于线粒体内膜，也是参与缺血预处理
和药物预处理的重要分子，可能在Dz长期预处理心肌保护效应消失中起着重要作用。
关键词：心肌；MitoKATP通道；二氮嗪；线粒体；蛋白质组
第三军医大学博士学位论文
EffIectfbr
long—term pretreatment
myocardioprotectiVeproteomic
0t mlt0Cnond啦=蚕
endomembrane
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Myocardialpretreatment
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