跑western blot的内参,我已经调整了上样量为什么我的内参还是跑不齐

小木虫 --- 600万学术达人喜爱的学术科研平台
&&查看话题
【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办
我做的是动物组织蛋白,定量时定的0.997,变性的时候盖子也盖紧了的,上样的时候也没有漏样,可是显影得到的β-actin就是不齐,就是不知道哪里出问题了,很郁闷啊,β-actin一眼就看出来不齐,我很悲伤。:tuzi3:
换一批就好了?不会吧,那这批的怎么办呢?
:tuzi3:谢谢
确实很磨人,但是师兄师姐做的时候,我觉得他们都做的很好啊
染色只看上面的还很均匀,但是下面一点就不是了,师兄说可能是取的肝的部位不同,我也不知道是不是
这个确实变性的时候存在这个问题,谢谢,下次我按你的方法做。那个降解的倒是不打可能,因为我是定量了立马就做了。
运气?不会吧,做的好的人还是做的好的
最近我们组的片子背景很黑& &系统重新换了的原因& &没找好最佳状态
新的抗体?
为什么要重新换系统,
原来的做的好,为什么不用原来的
不太明白前面几位答的什么...可能我是新手的缘故吧...
β-actin不齐,你电泳时的分层胶是哪个公司的?还是自己做的?
如果是自己做的,好好练习做胶
如果是买的,你电泳的电压和时间分别是多少?
不齐的话,电压小点,跑的时间长点.
:tuzi11::tuzi32:
原来的带浅& & 抗体太浪费了
不是说跑的前后不一致,是说最后得到的蛋白量不一样
是饿哦自己手法问题吧
关于【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办的相关话题在小木虫APP已经有288位虫友给出了详细回复。
赶快查看回复吧!
学术必备与600万学术达人在线互动!
扫描下载送金币
北京学而思教育科技有限公司 地址:北京市海淀区北三环甲18号中鼎大厦A座1层102室 电话:010-
浏览器进程
打开微信扫一扫
随时随地聊科研关注今日:11 | 主题:392246
微信扫一扫
扫一扫,下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】内参不齐,怎样调整使内参齐了?
页码直达:
这个帖子发布于3年零352天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用的是TCA法蛋白定量,目的条带出来了,可是内参actin总是发现不一致,可以重新跑胶在内参条带暗的地方加大上样量吗?这样做会不会影响最终结果的准确性,内参一致了能说明什么?是不是内参一致就表明上样量一致呢?
不知道邀请谁?试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我理解的是内参一致可以算是上样量一样。内参越黑的蛋白,上样量越大吧?你用的是压片做的?我只做过ccd成像系统的。灰度值越高蛋白越多。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
直接分析目标条带浓度和内参的比例就行了,上样量不可能一点都不差
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
两个办法:考染后根据内参条带调整上样量;根据内参western结果调整上样量
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
内参不齐,说明你在蛋白定量时不准确,没有把所有的样品都稀释成一致的浓度,若有未变性的样品建议重新定量变性,可换一种定量方法,比如BCA蛋白定量法。若没有样品了,可根据你的内参结果调整上样量,等内参基本一致的时候,做出来的目的条带才有说服力。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
laforet 直接分析目标条带浓度和内参的比例就行了,上样量不可能一点都不差
求助大侠!我也是内参跑不齐,我的是GAPDH,之前是测过BCA的,根据BCA上的样,但总是不齐,已经调整了好几次都不行,实验室的老师说可以直接比较目标蛋白的条带和内参的比例,与大侠说的一样,但是我实在是不懂。。。请教高手,具体应该怎么比较呢?比的是灰度值吗?怎样说明我的条带的意义呢?多谢啦!!
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
laforet 直接分析目标条带浓度和内参的比例就行了,上样量不可能一点都不差 直接分析比列外国杂志能接受吗 而且据所看的文献 都使用内参齐 再去报目的蛋白
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
同问.......
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
内参条带不可能做到特别完美 如果差的很多 那么就根据条带的差异来调整上样量 内参粗的上样量低一点 内参细的上样量多一点 直到肉眼看上去差不多就行了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
直接分析比例不可取,不能排除你的treatment对该内参有作用。应进一步测定浓度。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
dxd1219 内参条带不可能做到特别完美 如果差的很多 那么就根据条带的差异来调整上样量 内参粗的上样量低一点 内参细的上样量多一点 直到肉眼看上去差不多就行了我觉得这种方法实际应用价值更大.但想请教一下,这个调的过程是不是很麻烦,是不是很漫长?比如有20个样本,大概需要调几次呢?
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼上回答的都没提到重点,光叫人家直接调上样量,应该根据内参情况重新计算各样品的上样量吧。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
举个实用的例子,希望对大家有帮助:我现在也算从菜鸟向WB熟手转变了。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园Western Blot为什么必须要用内参_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员,立省24元!
Western Blot为什么必须要用内参
上传于|0|0|文档简介
&&了解内参的作用~
阅读已结束,如果下载本文需要使用0下载券
想免费下载更多文档?
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢

我要回帖

更多关于 western内参不齐 的文章

 

随机推荐