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做免疫荧光的新手求助。。。。希望各位前辈多给点意见 谢谢
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问题已关闭悬赏丁当:2
本人做的是小鼠肠道组织冰冻切片，然后做免疫荧光看肠黏膜巨噬细胞情况，我的步骤是这样：1.组织取材后立即放入4%多聚甲醛溶液中，4℃冰箱过夜固定（固定时间约24h）2.随后将组织放入PBS中漂洗干净3.依次放入20%、30%蔗糖溶液中脱水沉底4.OCT包埋-25℃切片 6um5.切好的冰冻切片阴干后放入-80℃冰箱备用。6.染色时：首先取出切片室温复温45min（阴干），再PBS漂洗3次，每次5min洗去OCT7.用1%的山羊血清稀释Triton-X100成0.3%
室温15min打孔。8.PBS洗片3-4遍，每次5min9.5%山羊血清室温下封闭40min，封闭后不洗，直接倒掉封闭血清。10.5%山羊血清稀释的一抗4℃冰箱孵育过夜（大约16h）。一抗是abcam的兔抗鼠：CD206
稀释比：1：50011.第二天取出后室温复温30min，PBS洗3遍，每次5min，12.甩掉切片上的PBS后，避光二抗孵育1h，二抗是碧云天的羊抗兔 1：1000
13.PBS洗3遍，每次5min14.DAPI原液5min，PBS洗掉，封片，观察。本来按理说肠道黏膜中巨噬细胞是在黏膜固有层，但是染出来确实大片绿色出现在肌层、上皮层，现在我很困惑，以上步骤应该怎么改进呢？有人说固定组织环节有问题：1.说多聚甲醛不能固定这么久（24h），说固定12h就行了，2.还有说应该切片后丙酮固定，（这两种方法有区别吗？）
还有整个过程中我都没有进行抗原修复，这有影响吗？求各位前辈帮帮小弟指点一二，谢谢了！
不知道邀请谁？试试他们
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丁香园荣誉版主
1.一定要做对照，首先保证结果的真实性，然后在分析原因。2.关于步骤，DAPI原液5min，可以缩减为2-3min3.步骤改进的话，最多就是加个抗原修复，如果你觉得结果不好的话，加个抗原修复试试，但是最主要的是对照要做好，保证结果的真实性；多聚甲醛的固定时间没有问题；切片后丙酮固定是另外一种组织制备的方法（简单如下--直接取材后冷冻切片，不脱水，直到切片结束后，及时丙酮固定，……）祝好运
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新手求助:《模拟人生3》中文免安装硬盘版下载了玩不了！！
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本帖最后由 向日葵のLOVE 于
13:12 编辑
我在星空下载了“《模拟人生3》中文免安装硬盘版下载”，按上面的安装说明安装之后还是不能玩，请高手们指点迷津！！谢谢~！
在这里下载的：
安装说明：
2.执行注册表程序reg.exe（根目录下有）
3.再到\Game\Bin子目录下，运行Sims3Launcher.exe即可，当然你也可以将该文件创建快捷方式至桌面。
另外游戏所需其他系统程序：
1.首先确认您的电脑已经安装directx9或者更高版本 否则请执行游戏目录DirectX文件夹内的DXSETUP.exe进行安装
2.本游戏需要vc,.net2.0，WSE 3.0 才能正常运行 所以请按顺序（注意要按照顺序）安装游戏目录下的vcredist_x86.exe，dotnetfx.exe，Microsoft WSE 3.0 Runtime.msi三个软件
我按上面的安装说明安装之后，运行Sims3Launcher.exe会出现以下文字：
The sims 3 cannot run.
The installation is incomplete.
Please reinstall and try again.
翻译后是：
模拟人生3不能运行。
安装不完整。
请重新安装，然后再试一次。
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本帖最后由 向日葵のLOVE 于
13:12 编辑
这儿看看。
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谢谢，看过了，但好像没有什么帮助！！
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& & 爱莫能助，呵呵~~~
轻轻的我走了，正如我轻轻的来。我挥一挥衣袖，不带走一片云彩。
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和我的情况一样，我的比你更加差，我用的是win7系统，解压后注册表文件自动消失，然后我到处下载注册表文件，安装后，仍然出现以上问题。。。。。。。非常非常无奈~~等待高手指点迷津~~~~~~~~
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我也出现这个问题...一直不能解决..好想玩的说
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& & 貌似WIN7系统玩不了。。。。
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别听那些废话，你的注册表坏了，下一个reg就可以玩了
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我那 是把杀毒软件给关了 之后再执行注册表程序reg.exe 之后就能玩了 之前也和你一样 这样之后就变成中文的了
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非常感谢8楼给出的解决方法，要知道我是安流量收费，50元就10G，这游戏就耗掉我25大洋了，要是就这么坏掉就亏大了。
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vc,.net2.0，WSE 3.0 那能下？
Powered by新手求助TP3.2如何新建一个除了HOME的新模块 - ThinkPHP框架
看了视频教程，上面介绍的3.13里是直接新建入口文件新建后台的模块，感觉这个在3.2里是模块的概念，请教如何在3.2里增加一个admin的新模块。谢谢！
ThinkPHP 是一个免费开源的，快速、简单的面向对象的 轻量级PHP开发框架 ，创立于2006年初，遵循Apache2开源协议发布，是为了敏捷WEB应用开发和简化企业应用开发而诞生的。ThinkPHP从诞生以来一直秉承简洁实用的设计原则，在保持出色的性能和至简的代码的同时，也注重易用性。并且拥有众多的原创功能和特性，在社区团队的积极参与下，在易用性、扩展性和性能方面不断优化和改进，已经成长为国内最领先和最具影响力的WEB应用开发框架，众多的典型案例确保可以稳定用于商业以及门户级的开发。新手求助（吾爱破解第三课去弹窗） - 『教学培训区』
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新手求助（吾爱破解第三课去弹窗）
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本帖最后由 就是随便看看 于
15:05 编辑
各位大神，新人求助
第三课去弹窗怎么修改弹窗内容。
个人修改之后不能输出正常的汉字。
附截图一张。
(262.49 KB, 下载次数: 0)
14:51 上传
怎么修改弹出的内容
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本来就是这样的呀 正常的要看下面那个窗体内容！！
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本来就是这样的呀 正常的要看下面那个窗体内容！！
下面那个窗体内容怎么修改
能说一下吗
在ascll还是unicode中输入我想显示的内容吗
另外问问怎么保存修改后的文件
1& &选中地址hex数据下面修改的数据然后复制到可执行文件在保存文件
2&&选中sendmessagew& &&&处的call push数据然后复制到可执行文件在保存文件
3&&两者都可以
很感谢你的热心回答
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下面那个窗体内容怎么修改
能说一下吗
在ascll还是unicode中输入我想显示的内容吗
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1& &选中地址hex数据下面修改的数据然后复制到可执行文件在保存文件
2&&选中sendmessagew& &&&处的call push数据然后复制到可执行文件在保存文件
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