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【求助】BDNF western blot 条带位置的问题
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各位老师好！我的组织样本为老龄小鼠的海马组织，用abcam公司的BDNF一抗做western blot实验，样品处理：PMSF/PMSF+蛋白磷酸酶抑制剂，两种都做过。分离胶12%，BDNF一抗稀释度为1:500，一抗过夜4度孵育，二抗室温2小时。说明书上讲测出的BDNF分子量是27-34，这个应该是pro-BDNF，但我的结果条带在35和40的两个位置有条带，请问，出现这个现象正常吗？有没有什么可能的原因会导致这个分子量变大呢？谢谢了！
不知道邀请谁？试试他们
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你好，我想知道你做出来了吗，我最近在做BDNF，怎么都做不出来，能不能指点一二，多谢了
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查了我们买的BDNF抗体的说明书，应该有功能的是14KD的，我们做出来有三条带，应该是最下面那条。
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乙酰基吗啡 查了我们买的BDNF抗体的说明书，应该有功能的是14KD的，我们做出来有三条带，应该是最下面那条。 您好，请问您能说一下具体的跑胶和转膜的条件吗？用的是0.22的PVDF膜吗？
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关于丁香园Isolation and Identification of BDNF in Cortex of Adult Rhesus Monkey and Its Distribution--《Journal of Kunming Medical University》2011年01期
Isolation and Identification of BDNF in Cortex of Adult Rhesus Monkey and Its Distribution
LI Yu1),WANG Bo1),WANG Ting-hua2),XIYANG Yan-bin2)(1)Dept.of Neurosurgery,The 1st Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming Yunnan )Institute of Neuroscience,Kunming Medical University,Kunming Yunnan 650031,China)
Objective To isolate and identify brain derived neurotrophic factor(BDNF)in the cerebral cortex of adult Rhesus monkey,and investigate its histological distribution.Methods The cortex tissues of monkeys were harvested,homogenized and isolated by SDS PAGE electrophoresis,and identified by western blot using rabbit BDNF specific antibody.Then the frozen sections from cortex were prepared,and the immunohistochemistry method was used to detect the distribution of BDNF in the cerebral cortex of adult Rhesus monkey.The biological function of BDNF was discussed.Results After electrophoresis,Western blot showed that a specific band for BDNF located in 14KD molecule weight was recognized from the homogenization of monkey cortex.The BDNF immunopositive reaction was seen in the plasma and neurite of neurons in the layer III and V cerebral cortex of monkey.Conclusions Electrophoresis can isolate many proteins from the cerebral cortex of Rhesus monkey.BDNF can be recognized and indentified by Western blot.BDNF is localized in the neurons of the cerebral cortex of monkey,suggestsing that BDNF may be a crucial molecule in the functional maintainence of CNS in adult monkeys.
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bdnf修饰骨间充质干细胞治疗ad的实验研究.pdf 116页
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bdnf修饰骨间充质干细胞治疗ad的实验研究
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天津医科人学博十学位论文
研究目的：1．建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、扩增方法；
2．探索携带BDNF的高拷贝质粒的构建以及转染骨髓MSCs的方法；3．探讨经
大鼠行为学、海马CAl区组织病理学改变的影响；4．探讨经侧脑室移植骨髓
TrkB表达的影响。
研究方法：1．取SD大鼠股骨骨髓，经贴壁筛选法进行体外培养，采用免
倒置荧光显微镜在蓝色光下激发绿色光判断转染效率，采用Westernblot方式判
定转染细胞是否表达BDNF蛋白；3．40只健康雄性成年SD大鼠随机分为Sham
大鼠模型，经侧脑室移植骨髓MSCs、空质粒修饰骨髓MSCs、BDNF修饰骨髓
MSCs观察对AD大鼠在定位航行试验以及空间探索试验中行为学改变，光镜下
海马CAl区HE染色、尼氏体染色的变化以及电镜下海马CAl区神经元及突触
超微结构的变化；4．采用RT-PCR及Westernblot方式，观察经侧脑室移植骨髓
TrkB表达的影响。
结果：1．SD大鼠长骨骨髓经过贴壁培养获得的细胞具有MSCs的表型，并
且经过反复贴壁传代获得纯度较高，活性较好的MSCs；2．
基因为报告基因，质粒构建成功；通过电穿孔技术以及G418筛选，明显提高
AD组与Sham组大鼠比较平均逃避潜伏期(AEL)延长、跨越平台次数明显减
天津医科人学博十学位论文
果：AD组大鼠海马CAl区神经元细胞数目减少，细胞排列不整齐，细胞器损
害较重，突触小泡减少，突触间隙模糊，突触数目减少；MSCs组、CON组、
BDNF组SD大鼠海马CAl区锥体细胞带保持较好的完整性，细胞排列较整齐，
细胞器超微结构损害较轻，突触小泡及突触数目减少有所减轻，突触间隙比较
清楚，以BDNF组改善更为明显：4．RT-PCR结果表明：各组大鼠海马组织中均
表达BDNFmRNA、TrkBmRNA，
AD组与Sham组比较表达量明显减低
组比较表达量明显减低(P&O．01)；
(P&0．05)。
结论：1．通过体外贴壁筛选法扩增培养，获得大量纯度较高、活性较好的骨
髓MSCs；2．电转染是很好的基因转染干细胞，提高转染效率的方法，使用电转
染方法转染骨髓MSCs可以提高转染效率；3．双侧海马注射AB2&5成功诱导AD
大鼠模型，方法简单，成功率高；经过侧脑室移植BDNF修饰骨髓MSCs或MSCs
可以提高AD大鼠学习记忆能力，减轻大鼠海马CAl区的神经元及突触的损伤，
以前者改善更为明显，因此认为BDNF在神经修复中起着重要作用；4。经侧脑
马区BDNF、TrkB的表达，以前者更为明显，有可能是干预治疗AD的机制之
关键词：问充质干细胞；脑源性神经生长因子；酪氨酸激酶B；阿尔茨海默病；
plRESneo质粒
天津医科人学博十学位论文
themethodfortheisolationandcultivationofratbone
objective：1．EstabIlish
themethodof
constructinghigh—copy
expressing
MSCs．2．Explore
BDNFandthemethodofBDNFtransfectedbone
MSCs．3．Investigate
正在加载中，请稍后...Western blot analysis of BDNF in the CA1 region of the sham,...
ContextWestern blot analysis also showed a similar change in BDNF levels in the vehicle-ischemia group compared to the immunohistochemical findings after ischemia/reperfusion (Figure 3): BDNF level in the vehicle-ischemia group was lowest at 4 days post-ischemia. In the 50 mg/kg EAKS-ischemia group, BDNF levels were higher than in the vehicle-ischemia group, showing levels that were similar to those in the EAKS-sham group.Join ResearchGate to access over 30 million figures and 100+ million publications – all in one place.Mar 2011[...]ArticleFull-text availableDec 2012MOLECULESArticleFull-text availableJun 2012ArticleJun 2012NAT PROD COMMUNArticleJul 2014ArticleFeb 2015MICROELECTRON RELIABArticleDec 2016PHYTOCHEM LETTShow moreAdd comment