请教有关northern westernblot转膜时间的问题

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有大虾做过northern blot吗?非常期望得到您的指导
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这个帖子发布于13年零314天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好,我现在在准备做northern blot,但周围没有人做过,希望得到大家的帮助,先谢过!1,northern blot是不是有现成的试剂盒买啊?我查了一下,好像只有一家pierce的公司有,不知各位用的哪个公司的?贵不贵啊?2,哪位有northern blot试剂盒的说明书,希望能发给我看看,想利用寒假做一下实验准备。谢谢大家!
不知道邀请谁?试试他们
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NorthernMax& KitFormaldehyde-based system for Northern blots. NorthernMax&-Gly KitGlyoxal-based system for Northern blots. good luckattach is the protocol
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zhaofei 编辑于
斑竹,非常谢谢:)我回去仔细看一下再向您请教:)你的英文真好,好,好!呵呵!
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想再请问一下,做northern除了电泳槽以外是不是还有一个转膜槽?转膜的时候大家用的是传统的纸巾还是真空转膜什么的?我看分子克隆上面的是用的纸巾对吧?谢谢:)
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&&northernblot 做成這樣。。。。幫忙看下爲什麽呢,多謝了
northernblot 做成這樣。。。。幫忙看下爲什麽呢,多謝了
哪位知道像這樣的Northernblot是什麽原因么,多謝各位
用的是試劑盒呢,RNA 提的应该是没问题的,只是有点点降解。Marker左边上样量为0.1微升,右边为0.4微升,
-RNA.jpg,
人家还没到转膜吧
是最后的显色,不是胶
感觉不像是量上多的,最左和最右是飘出来的少量,结果也是有很亮的非特异性杂交条带,我的目标条带大小应该在中间位置,~70bp
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&&关于western blot转膜
关于western blot转膜
最近开始做western blot,但是转膜这一步总是不成功,我用的是半干式转膜法,180mA和1h左右,100mA1.5h都试过了,根据转膜仪上面得说明,转膜时间已经足够了,可是丽春红染色后还是没有条带。
我用的滤纸是普通的滤纸(不是3mm滤纸),这会有影响么?另外我用的PVDF膜已经有一段时间了,这个会不会存在过期的问题?
希望大家帮助,谢谢!!
恩,先用甲醇浸泡,然后用转膜缓冲液浸泡的
那你有没有预染marker,你可以用一下,看看是否是转膜这步出了问题。
滤纸应该不会有很大影响,我们实验室也是用这样的滤纸,膜一般不会过期,放置条件好的话,可以放好几年的,
没有用过预染marker
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