谁送的龙蛋我蛋T_T

〖原创〗很纯很暧昧后传之杨浩篇
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【求助】请大家看看我的SDS-PAGE,我该怎么提好全蛋白T_T
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这个帖子发布于7年零112天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我的实验要提很多个物种的蛋白目前就酵母的提的还比较好大肠杆菌的和小鼠的都不太理想。。上图左边两道是小鼠的脑组织全蛋白,右边是大肠杆菌的全蛋白我的问题是1.感觉小鼠的蛋白都没有提出来?2.大肠杆菌的好像降解严重?3.我对照胶完全不懂。。所以很难留下好照片。。望各位帮助呀。。谢谢诶!!我提小鼠脑组织蛋白的方法就是先用生理盐水洗一下脑组织,然后剪碎,然后加入裂解液RIPA匀浆,离心,煮。提大肠杆菌的也很简单,就是加入一些裂解液悬起沉淀然后和上样buffer一起煮10min。。为什么就是降解呢。。我已经很注意冰上操作了。。。谢谢大家!!!
不知道邀请谁?试试他们
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提过几次小鼠脑组织,不过都是-80拿出来的,要很注意我一般在干冰上操作,要非常注意蛋白降解
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1,2泳道算是没有蛋白吗 怎么是树形条带啊
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离心时间不够吧,40min ,13000rpm,上样量减少试试
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非常感谢!我试试增加离心时间吧!!感觉是没有蛋白。。。
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可以尝试离心时间,我做的组织中提蛋白都是12000转,离20分钟,要进行3次离心。还有你上样的时候,有没有观察过你的样里面是不是有沉淀样的物质。如果有的话还要稍微离心一下(这一点还可以另外一种尝试,就是用枪反复吸打,把那个沉淀溶解掉,我这样做的效果要比把它离心掉效果好些)。煮的时间可能也长了点,我都是煮2分钟。
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我也遇到差不多的情况,提取脑组织的蛋白含量不高。裂解液也都换了,还是提不高。
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