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人cAMP依赖型蛋白激酶抑制剂β和人ERp29克隆、表达纯化和结构的研究.pdf86页
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复旦大学硕上学位论文人PKI B和人ERp29的克隆、表达纯化和结构研究 摘要 本论文研究包括二部分: 1 人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂 PKIB 的表达纯化和结构功能研究 2 人ERp29的克隆、表达纯化以及结构和功能研
究。 人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂 PKI9 是一种新的耐热蛋白,它由78
个氨基酸残基组成,理论分子量为8648.2道尔顿,等电点为4.69.实验证明,
人cAMP依赖型蛋白激酶6抑制剂是对PKA催化亚基 c 具有抑制作用的蛋白
之一。人脑胶质瘤和正常脑组织问的差异表达表明人PKIB基因可能与人脑胶质
瘤的形成与人脑的发育过程有关。 为了表征人PKIB结构特征和更好地了解它的生物学功能,首先,我们利用
2D1HCOSY,TOCSY和NOESY等二维核磁共振技术,在BrukcrDMX500核磁共
振仪上,用TPPI方法纯吸收模式,测得了人PKIB的一系列二维核磁共振谱图,
得到了部分结构信息。 在此基础上,我们以M9培养基为介质,用1。N标记人PKIB,通过高表达和
纯化,得到了”N均匀标记的人PKIB样品,在500兆核磁共振仪上分别对样品 15N―H 15N_1H 1N一1H
进行了2D HSQC,2D”N-IHHSQC―TCOSY,2DHSQC―NOESY和3D
HSQC-NOESY等NMR实验,我们采用“自旋体系识别”和“序列归属”的方法对
”N均匀标记的人PKI p的上述NMR谱峰进行了归属,大约90%的”N和’m峰已经
得到归属。在上述工作的基础上,我们用化学位移标志 CSI 方法识别人PKI 8的二级结构单元并确定了它们的序列位置。该结果与我们之前用cD和FTIR Q
获得的数据基本一致。与野兔PKINMR实验结果的比较显示,人PKIB很可能
也是由具有抑制功能和出核信号功能的二个结构非常相似的结构域组成。 目前我们正试图表达和纯化一定量的PKAC样品,深入研究1N标记的人PKI B与PKAC之
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