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&临夏地区住院病人中艾滋病的调查、检测与分析
临夏地区住院病人中艾滋病的调查、检测与分析
摘要 目的 通过分析甘肃省南部回族、东乡族、保安族、撒拉族和汉族杂居区—临夏回族自治州住院病人中的血清学分析及流行状况调查，了解本地区人群中艾滋病的流行情况，为艾滋病的预防和治疗提供信息和依据。方法 通过对2007年至2008年临夏州人民医院住院患者共22317例病人抽血样进行艾滋病血清学监测，初筛阳性标本送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认，分析该地区住院病人中艾滋病流行特征。结果 年共完成检测22317例，共初筛检出HIV-Ab阳性8例，送送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认，4例被确认为阳性；3例不确定，继续随访；1例确认为阴性。HIV-Ab阳性率为0.0314%。结论 年本地区的艾滋病在住院病人中流行明显加快，预计今后HIV者将在从医院中检测出的可能性将大幅增长，为防止HIV进一步蔓延，需加大防治力度,特别是防止医院实验室技术人员、医护人员的职业暴露有重要指导意义。
关键词 艾滋病 住院病人 流行 少数民族 HIV-Ab
&& &艾滋病即获得性免疫缺陷综合症（AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染机体后所引起的人体免疫功能、特别是是细胞免疫功能损伤的一类疾病，致死高、危害严重。艾滋病主要经性接触、血液和母婴垂直途径传播。艾滋病的检测目前常用血清学方法检测艾滋病抗体，如ELISA、快速凝集筛选试验、western blot印迹法等，常以ELISA方法进行HIV抗体筛选，western blot印迹法确证⑴。自1985年在中国发现第一例艾滋病感染者以来，其感染者人数逐年增加，引起了国家和医疗卫生以及生物科研领域的高度重视，对预防和控控制HIV的传播和扩散采取了许多相应的措施。近几年来通过检测发现艾滋病感染者从吸毒人群、临床输血人群逐渐转变为主要由性传播为主要传播途径，也就是说由以前的主要由特殊人群之间传播转变为在普通人群之间传播。这样传播可能更容易且速度会加快，近年来从医院普通就医者中发现的艾滋病感染者逐渐上升，这是一个信号，以后有许多艾滋病感染者将从医院发现，同时对HIV的医院内感染控制工作是一个考验。为此我们从2007年开始对住院病人入院时进行HVI-Ab初筛检测，初筛阳性标本按《全国艾滋病检测技术规范2004版》⑵要求送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认，本文对年度22317例住院病人艾滋病抗测情况进行统计分析，对在艾滋病新的流行形势下，加强艾滋病预防、医院内感染控制、治疗方面提供参考信息。
1． 材料与方法
1.1& 实验对象& 2007年至2008年来临夏州医院住院的所有患难22317例。年龄3天至81岁,男性：11200例；女性：11117例，其中汉族9820例；回族8925例；东乡族2232例；保安族、撒拉族等其它少数民族1340例。
1.2& 方法& 所有患者入院时空腹采血，分离血清，采用第三代艾滋病抗体ELISA检测试剂进行检测，初筛阳性样本用原检测试剂加另一厂家试剂复检，如两种试剂均阴性，报告阴性；如出现两种试剂均阳性或一阴一阳，送临夏州疾病控制中心初筛中心实验室复检，再转送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认。
1.3& 仪器和试剂& 使用郑州安图Anthos2010酶标仪, 郑州安图洗板机，HIV-Ab检测试剂使用：北京金豪制药有限公司和北京华大吉比爱生物技术有限公司的抗-HIV ELISA试剂。
2.1在22317例检测样品中，共初筛检出HIV-Ab阳性8例，送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认，4例被确认为阳性；3例样本确认为不确定，继续随访；1例确认为阴性。该人群中HIV-Ab阳性率为0.0314%。
2.2在初筛检出的HIV-Ab阳性的8例样本，送省艾滋病确证中心实验室确认为阳性的WB检测法的结果和不确定的WB检测结果如下表1。
表1& HIV-Ab筛选阳性的样本在确认实验室的检测结果
编& 性&& 年& 民& 文
&&&&&&&&&&&&&&&& 化
&&&&&&&&&&&&&&&& 程
号& 别&& 龄& 族& 度
HIV-Ab检测结果
确证实验室WB检测结果⑷
北京金豪 吉比爱
s/co&&&& s/co
1&& 男&& 32& 回& 文盲&&& 27.4&&&& 17.5&&&& gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p17
2&& 女&& 32& 回& 文盲&&& 27.4&&&& 20.5&&&& gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p17
3&& 女&& 27& 汉& 高中&&& 17.7&&&& 23.9&&&& gp160(结果为不确定)
复检&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& gp160/p24(结果为不确定)
4&& 女&& 32& 汉& 大专&&& 27.4&&&& 21.7&&&& gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p17
5&& 男&& 43& 汉& 大专&&& 26.3&&&& 10.9&&&& gp160/p24& (结果为不确定)
6&& 女&& 28& 汉& 高中 &&&4.4&&&&& 4.35&&&& p24(结果为不确定)
7&& 男&& 36& 回& 文盲&&& 27.4&&&& 18.7&&&& gp160/gp120/p66/p55/gp41/p31/p24/p17
8&& 女&& 28& 汉& 高中&&& 11.5&&&& 0.31&&&& 阴性
注：北京金豪：北京金豪制药有限公司；吉比爱：北京华大吉比爱生物技术有限公司。
近年来随着艾滋病主要从特殊人群之间传播趋势转变为在普通人群之间的传播趋势，从医院普通病人中初筛检测出滋病抗体阳性的几率越来越多。所以医院院内感染控制工作应把艾滋病的初筛检测及医务人员的职业暴露的防护工作应加强。
HIV检测不同于普通病原体的检验，检测结果如果造成假阳性或假阴性，都引起严重后果，所以检测要求很高⑶，应按照《全国艾滋病检测技术规范》⑵的要求进行检测。我们在初筛检测中应用两种ELISA试剂检测，保证了试验的特异性。经初筛阳性标本和一阴一阳标本经WB确证,有4例是阳性，3例检测出了部分条带，被判为不确定，其中有一例标本经三月后再次送确认实验室做WB，又被判为不确定，是何原因有待研究。从本次试验统计中可发现，ELISA实验中随着S/CO值的增高，其与确证试验的阳符合率也随之升高。但是S/CO高的标本也有被WB法确认为不确定，S/CO低的标本也不能判为阴性。所以我们初筛实验室必须严格按《全国艾滋病检测技术规范》的要求对初筛阳性的标本和一阴一阳的标本必须送上级确证实验室做WB确认。
⑴邓长生 符小华 李伟扬编 《诊断学》人民卫生出版社.
⑵《全国艾滋病检测技术规范》2004年版
⑶中国艾滋病防治信息.2008年第2期.总第6期.
⑷为甘肃省疾病控制中心艾滋病确认中心检测数据。
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共1条医生回复
因不能面诊，医生的建议及药品推荐仅供参考
职称：医生会员
专长：高血压、糖尿病、心血管疾病
&&已帮助用户：120540
问题分析： 是感染了hiv，不需要复查了。剩下只做一些病毒载体量和cd4,cd8计数了，
再有就是吃一抗病毒药物了。意见建议：想吃点啥吃点啥，想去哪儿逛逛去哪儿逛逛吧。看开点。
心态很重要，心理有时候是可以改变生理。。。。。
问P24,p31,p51,p66,gp41,gp120,gp160,是什么意思?最近检查确认hiv抗
职称：副主任医师
专长：冠心病,心肌缺血,心肌梗死
&&已帮助用户：3818
指导意见：你好 这个HIV阳性？是要积极进行确定有无这个疾病的原因 。
问艾滋病Wb实验出现3条带的话是己经感染了吗？
职称：医生会员
专长：手足癣,传染性软疣,白驳风
&&已帮助用户：409612
指导意见：您好,
目前你说的情况,有可能的,主要看抗体是不是阳性.注意多休息,避免熬夜,多补充维生素,避免一下辛辣食物,做到心情舒畅.
问出现艾滋病WB带型是不是己感染艾滋病了
职称：医生会员
专长：手足癣,传染性软疣,白驳风
&&已帮助用户：409612
指导意见：您好,
根据你说的情况,高度怀疑感染的.注意多休息,避免熬夜,多补充维生素,避免一下辛辣食物,做到心情舒畅.
问出现了3个艾滋病条带是不己感染了艾滋病?
职称：医师
专长：皮肤病、性病
&&已帮助用户：1923
问题分析：根据你所告诉我的这个情况已经可以确定你感染了艾滋病。因为你现在做的是wb实验。wb实验室艾滋病病毒的确诊实验。意见建议：当然感染了艾滋病也不要彻底的绝望，现在艾滋病病毒我们可以采用很多的方法去控制它现在国家对于一线下午和第二线药物都是免费的，因此对您的寿命影响不是说特别的大，希望你能够正确的面对，一定要坚强。
问艾滋病检测结果gp160,gp120,p66,p51,gp41,p31,p24,p17是属于...
职称：医师
专长：普外科疾病、肛肠科
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指导意见：你好，根据你说的情况是需要你到医院给予抽血检查，确诊后可以给予抗病毒治疗的
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指导意见：你好，对于这样的情况考虑可能跟自身体质有关系，可能是功能性障碍的问题引起的，需要进行细致的调理
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反转录病毒
第三十一章 反转录病毒尚红艾滋病概述? ?获得性免疫缺陷综合征，简称艾滋病（Acquired immunodefieiency syndrome，AIDS）。??由一种名为“人类免疫缺陷病毒”（human immunodeficiency virus, HIV）所导致的疾病。 主要侵袭辅助Ｔ淋巴细胞，破坏免疫系统，最 终使患者免疫功能衰竭而死亡。 传染性强，死亡率高，号称“超级癌症”。HIV的发现Montagnie (LAS) 1983. Science 220: 868-871 Gallo (HTLV) 1983. Science 220: 865-86 Levy (ARV) 1984. Science 225: 840-8421986国际病毒分类委员会：HIV-2 1986 西非HIVHIV的分型及其亚型? ?现有两型HIV：HIV-1和HIV-2， 种类 ? HIV-1 M（Major）组 A→D,F→H,J,K O（Outlier）组 O N（Non-M non-O）组 N ? HIV-2 A →F 特点? ? ? ? ???有相对优势亚型 同一亚型差异很大 亚型内的变异水平估算存在时间 不同亚型传播途径和致病性不一 不同亚型对抗-HIV药物引起耐药不同 亚型重组HIV生物学特性? ?反转录病毒科，慢病毒属，人类免疫缺陷病毒组 根据病毒的生物学特性对HIV-1进行分群病毒与宿主细胞 结合所利用的辅 助受体的不同 根据宿主范围 复制特性不同 R5毒株 (利用CCR5) 非合胞体诱导株 （NSI） 毒力株 快/高型 X4毒株 (利用CXCR4) 合胞体诱导株 （SI） 无毒力株 低/慢型HIV生物学特性―结构? ??病毒呈球形，直径100―120nm，电镜下 可见一致密的圆锥状核心 核心： 2个逆转录酶 - 将RNA转录成DNA 蛋白酶 (p11) - 将大片断蛋白切小 整和酶 (p32) - 将HIV原病毒DNA插入宿主细胞DNA中 核心膜蛋白(p24, p17) 包膜： 脂质膜 - “借用”宿主细胞的细胞膜 gp120 - 病毒的膜蛋白，与被感染细胞CD4相结合部份 gp41 -病毒的膜蛋白， 跨脂质膜的部分
HIV生物学特性―基因结构??? ???由两条单链RNA组成，每个基因组约为9.7k，编 码9个基因 RNA中含有3个结构基因gag、env 和pol，6种调 控基因 tat, vif, vpr, vpx (vpu), nef, rev gag基因编码病毒的核心蛋白 pol基因编码病毒复制所需要的酶类（逆转录酶、 整合酶和蛋白酶） env基因所编码病毒包膜蛋白，是HIV免疫学诊 断的主要检测抗原 调控基因编码辅助蛋白，调节病毒蛋白合成和 复制tat revnef envLTRgagLTRvif polvpr tat vpurevP55gp160P17P24P7 P6gp120gp41P10P66/51P15P32HIV生物学特性―临床意义?HIV结构成分与病毒感染、临床诊断、药物、 试剂和疫苗研究密切相关包膜糖蛋白是病毒进入细胞的门户 针对各种病毒抗原（gp120,gp41,gp24等）产 生的抗体是临床诊断的重要物质基础??HIV生物学特性―对病程的影响?病毒与宿主之间的相互作用是决定病程 进展的关键因素。NSI型――早期，进展慢，R5受体SI型――晚期，进展快，CXCR4受体HIV的感染性?? ? ? ? ?对外界抵抗力较弱 对热、乾燥敏感60℃ 60min, 80℃ 30min，121℃ 15min, 134℃ 3min不耐酸（PH6），稍耐碱（PH9） 对化学品敏感0.5％次氯酸钠、70%酒精、10%漂白粉、2%戊二醛、4%福尔马林等对紫外线不敏感 注射器具、医疗用具通过高温消毒、煮沸或蒸汽 消毒完全可以达到消毒目的HIV传播途径?性途径 同性恋、异性恋、双性恋、共用性模拟器血液途径 输血或血液制品、受精液或卵子、与他 人共用针具静(肌)注毒品、意外损伤后接触HIV感 染性材料 母婴垂直传播 妊娠、生产、母乳喂养??HIV致病机制―高速复制?每天产生10～12亿个新病毒颗粒HIV变异 ? 每天突变1万个 逆转录酶缺乏3‘-5’外切核酸的校读功能，使 RNA转录为DNA时经常出现错误。 ? 比真核细胞高100万倍。?HIV致病机制―进入易感细胞途径HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合HIV致病机制―关于第二受体?与HIV有关的辅助受体有2类：CC型辅助受体：CCR1,CCR2b,CCR3.CCR5 CXC型辅助受体：CXCR4 CCR5是最主要的第二受体，第二受体基因在不同 人种中遗传的突变率有明显差异。缺乏第二受体 表达的个体似乎对HIV-1有一定的抗性。?HIV致病机制―进入的其他方式?病毒－细胞融合NSI型与SI型? ?半乳糖苷神经酰胺（GalC)受体途径。MHC相关分子，淋巴细胞功能相关抗原1，Fc和 补体受体介导途径。HIV致病机制―复制周期吸附和穿入脱衣壳和逆转录 环化 整合 转录 翻译与装配 病毒体成熟出芽HIV致病机制―人体变化? ? ? ? ? ? ?体内播散期：2天达淋巴结，5天入血循环全身 播散。 原发HIV感染期：一般2～4周 血清转换期 无症状感染期 艾滋病前期 艾滋病期 艾滋病晚期HIV致病机制―临床结局? ? ?典型进展者： 8～10年内，免疫功能逐渐下降。 快速进展者： CD4+细胞计数在2～5年内迅速下降长期存活者：（长期不进展者） 维持健康状态12年以上，并且CD4+细胞计数维 持正常。病毒载量低，NSI株，抗体不加重感染， I型细胞因子， CD8+细胞抗病毒反应很强。成人及青少年艾滋病分期标准（CDC，美国，1993年）临床阶段CD4+T细胞 A 无症状或急性HIV感 染或持续性全身淋巴结 肿大 A1 A2 B 出现症状， 不是A或C B1 B2 C 艾滋病指针性症 状 C1 C2&500/ul （≥29%） 200-499/ul （14-28%） &200/ul （&14%）A3B3C3CD4&200/ul 和 / 或出现艾滋病指针性症状（如卡氏肺囊虫肺炎 等）时，就可定义为进入艾滋病期。如表中A3，B3，C1-3期。HIV检测?直接检测病毒或其组成部分?检测人体HIV免疫反应――HIV特异性抗体从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为 1～3个月，有一小部分HIV感染者出现延迟反应P24抗原测定适用范围：? ? ??HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断 HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断 第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应， 但HIV-1抗体确认阴性者的诊断 监测病程进展和抗病毒治疗效果P24抗原测定结果报告和解释 ? HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认 ? HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依 据，不能依此确诊 ? HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应， 不能排除HIV感染HIV核酸检测窗口期辅助诊断 病程监控 指导治疗方案及疗效评价 预测疾病进程80 70 60 50 40 30 20 10 0 6年发病率? ? ? ?&500 501-- 10001- & 30000 血浆病毒载量（拷备数/毫升）HIV核酸检测―定性检测?? ???用于HIV感染的辅助诊断。通常使用PCR或RT-PCR 技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂， 引物可来自文献或自行设计，应尽量涵盖所有的 或常见的毒株，也可使用复合引物。 通常根据扩增产物的电泳图像判定结果，阳性结 果还要进行核酸序列测定来确定。 HIV核酸检测阴性, 只可报告本次实验结果阴性， 不可排除HIV感染。 HIV核酸检测阳性, 可作为诊断HIV感染的辅助指 标，不单独用于HIV感染的诊断。 报告核酸定性检测结果时应注明反应条件和所使 用的引物序列。HIV核酸检测―定量检测?? ? ?常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效 果。目前常用的方法有逆转录PCR实验（RT-PCR）、 核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验 （bDNA）等，这几种进口试剂盒的最低检测限为 20～50拷贝/毫升 按照仪器读数报告结果，应注明使用的试验方法、 样品种类和样品量 测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限 水平。注意低于最低检测限结果不能排除HIV感染 应附上仪器打印的数据HIV核酸检测―样品的采集和处理? ??用于HIV核酸检测的样品有全血、血浆、组织和其 他分泌物，有时还包括生物制品 采集样品应避免微生物和核酸污染。避免RNA酶造 成的降解，采样后4～8小时内处理。处理后的样 品应分装、标记，冻存于-20℃以下，RNA类样品 冻存于-80℃ 应在2℃ ～8℃条件下运送。特殊情况下，可以用 特快专递形式投寄，但必须将盛样品的试管包扎 好，保证不会破碎和溢漏HIV核酸检测―定量检测方法的比较Roche Bayer (前Chiron) Organon技术结果 比较 优点RT-PCR约2xbDNA 2.0bDNA2.0版结果约为RT-PCR的50%， 3.0版 结果与Roche 基本相同 操作时间较少 对A-G亚型有较好的反应性Nuclisens HIV-1 QT与Roche 基本相同通过了 FDA认证 假阳性结果较bDNA少 1.5版对A-G亚型有较好的反应性通过了 FDA认证 可使用多种组织，如生殖道分泌液 对A-G亚型有较好的反应性 检测范围大?早期版本（NASBA）对部分亚型（G缺点?操作容易污染 ?测定范围较小（相对于NASBA） ?少数生物样品反应受抑制，如精液?对低值样品检测的特异性较差。 ?无内部质量控制，尤其在3.0版中为、乳汁和唾液 ?早期版本对部分亚型反应性较差， 1.0版对非B亚型的样品反应性普遍较 差，（5）版通过改进 ?对O亚型检测能力较差单孔检测时，无法控制由于提取或加 样操作的失误。 ?不同版本间差异较大，2.0版约为 RT-PCR50%，3.0版结果与Roche 基本 相同表明两个版本间差异可能达到 50%。 ?对除血浆、血清外的大部分体液样 品无法进行检测。 ?对抗凝剂敏感，只能使用EDTA。 bDNA 3.0版: 100 ～ 500,000 c/mL亚型）反应性差。 ?操作复杂，样品提取(不使用自动提 取仪时)和测定反应时需要进行大量 的手工操作。 ?不适合一次大量检测，ECL读数仪每 次只能进行12个样品的检测。 ?实验内、外误差相对较大。检测 范围标准版 (Amplicor 1.0 及 1.5) 400 ～ 750,000 c/mL 超敏版 (Ultra-Direct 1.0 and 1.5): 50-75,000 c/mLNuclisens HIV-1 QT:
c/mL (取决于样品量)HIV核酸检测―定量检测方法的选择?目前用于统一不同定量方法检测值的标准品尚未问世??不同定量方法结果之间还无法直接进行比较建议同一病人治疗前后用同一方法进行HIV定量检测病毒分离培养?可用于HIV-1感染的辅助诊断及HIV-1抗体阳性母 亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断 培养及分离HIV需要在特定的P3实验室进行，且 HIV的分离率在30% ～ 60%，这项试验仅用于HIV 株的保存和科学研究?HIV抗体诊断目前临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体，包括初筛和确认 实验。HIV抗体诊断―检测试剂? 筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监督 管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优 1. 良、在有效期内的试剂。? 目前常用的筛查试剂有酶联免疫(ELISA)、颗粒凝 集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛 查应采用酶联免疫试剂。? 自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚未 建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训 的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛 查。HIV抗体诊断―ELISA方法? ???目前最常用的初筛实验 1985年第一代检测HIV-1抗体的试剂盒问市 （全病毒抗原间接法） 目前采用第四代检测HIV-1抗体的试剂盒 （以重组的多肽抗原和抗P24抗体包被的双 抗原夹心法） 窗口期缩短了2 ～ 3周HIV抗体诊断―四代试剂比较solid phase conjugate -IgG抗体 specific detection of IgG 抗体 HIV-1第一代病毒裂解液 HIV-1第二代病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2IgG抗体IgG 抗体 HIV-1 / -2第三代病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -OIgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O第四代病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 Ab病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O p24 抗原Closing the windowHIV antigen 4th gen 3rd gen IgM ab IgG ab 1st-2nd genDetection limit&= window=&=&=&第一/二代试剂检测IgG抗体，第三代试剂检测IgG 、IgM抗体, 第四代试剂同时检测IgG、 IgM抗体和P24抗原使窗口期缩短。HIV抗体诊断―结果报告和处理? ?阴性反应出具HIV抗体阴性报告如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或 有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的 可能，可以进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测， 或2 ～ 3个月以后再做抗体检测?筛查实验呈阳性发现反应，可出具“HIV抗体待复查”的报告，不能出阳性报告样本选用初筛试剂初筛检测阳性反应原有试剂＋另一 种原理初筛试剂阴性反应重复检测阴性报告均阳性反应 送确认一阴一阳均阴性反应 阴性报告HIV抗体初筛检测流程图HIV抗体诊断―快速诊断试剂? ? ? ??采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理 快速、不需特殊仪器 敏感度、特异度低于ELISA，且价格贵 适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊 手术前检查 快速诊断阳性结果还需经ELISA方法验证HIV抗体诊断―快速诊断试剂阳性结果 阴性结果阳性结果可出现病人带和质控带两条带，阴性结果只出现质控带一条带HIV抗体诊断― HIV抗体确认? 常用的确认实验方法是免疫印迹法（WB） ? 免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型，一般 先用HIV-1/2混合型试剂进行检测HIV抗体诊断―蛋白印迹实验（WB）? ? ???广泛使用的确认实验 用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的HIV抗原蛋 白分开后转移到硝酸纤维膜上 标本的HIV抗体与条带上的抗原结合，再加 入酶偶联的抗人IgG抗体和底物，在抗原抗 体结合的部位会出现有色条带 可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体，故 被用做确认试剂 不同的研究机构有不同的判定标准HIV抗体诊断― WB结果判定标准组 织 WHO 阳 性 阴 性2 ENV+GAG+POL 1 ENV + p24/p31无条带或只有P17 无条带FDA（USA）CHINA２ENV 或１ENV+p24 无HIV-1特异性条带“不确定”(±)：出现HIV-1特异性条带，但带型不足以确认阳性，每三个月随访一次，共两次， 仍属可疑，判为阴性HIV抗体确认实验结果a b c d gp160 gp120 p66 p55 p51gp41 p39p31 P24 p17血清对照 HIV-2特异带a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b 弱阳性对照（HIV-1） c 阴性对照 d 典型的HIV-2血清阳性反应初筛检测阳性标本 复 阳性反应 核 两种初筛试剂 阴性反应 阴性报告 免疫印迹法WB-1/2混合型一阴一阳HIV-1 阳性反应HIV-1 阳性报告可疑反应阴性反应阴性报告出现gp36免疫印迹法WB-2HIV-2 阳性反应报告HIV-2血清学 阳性反应,必要时测核酸可疑反应阴性反应阴性报告每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体确认实验流程图CD4+T细胞绝对数量HIV感染 CD4+T细胞数量下降CD4+T淋巴细胞介导的免疫 功能逐渐丧失 CTL丧失必要的体内环境， 功能下降CD4+T淋巴细胞小于350/ul（结合病毒载量，确定治疗时机）有效HAART治疗8周后CD4+T淋巴 细胞数量增加50/ul 无效CD4+T细胞绝对数量? ?HIV感染通过多种直接和间接的病理机制，导致CD4+T数量的缺失。 CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞，其数量和功能的下降是 HIV感染引起人体免疫功能缺陷的主要体现。 外周血中 CD4+T 淋巴细胞的数量对于确定 HIV 感染状态、是否进入 AIDS期、机会性感染及肿瘤发病的可能性以及评价治疗效果具有极 其重要的作用。?结果回报单CD4绝对计数结果病毒变异和耐药性的测定?随着HAART治疗的广泛开展，病毒变异和耐药 株正在不断出现，甚至对一个药物的耐药可引 起多种药物的交叉耐药。因此近年来各国相继建立起病毒变异和耐药的 测试方法，包括基因型HIV耐药测试和表型HIV 耐药测试。?基因型HIV耐药性测试方法?当病毒对某些药物产生耐药性时，病毒基因会发生一些明 确的突变。病毒耐药基因型的检测有助于预测某些药物的 治疗效果。检查从病人血液标本中分离到的HIV基因物质，应用核酸 酸序列分析或杂交技术以确定病毒变异的位点，并可参考 已有数据库按不同亚型进行比较。在确认变异后，与既往 耐药或交叉耐药研究比较，间接地估计药物耐药情况，?? ?简单快速，费用低。缺点是能确认所分离到的基因变异，但无法指出药物耐药 的程度。与逆转录酶有关的变异与蛋白酶有关的变异表型HIV耐药性测试方法??能直接测出 HIV-1 对药物的敏感度，并能揭示事先存在或 交叉的耐药情况，有利于指导HIV-1感染者有效地用药。 目 前 市 面 上 供 应 试 剂 盒 已 有 2 种 ， 即 AV （ Vicro Antivirogram）和PS（Virologic PhenoSense），两者方 法均应用从生长于载体中的 HIV-1 而获得的重组病毒和病 人标本中蛋白酶与逆转录酶序列，分析与野病毒之间IC50 值相差倍数，一般达5 ～ 10倍以上为阳性。 这种方法的最大优点是可以获得各种药物耐药量度数据， 但不足的是试验慢又昂贵，技术要求高。?Virologic PhenoSense结果HIV检测注意事项? 筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监督 管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、 在有效期内的试剂。 ? 目前常用的筛查试剂有酶联免疫(ELISA)、颗粒凝 集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查 应采用酶联免疫试剂。 ? 自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚未 建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的 技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。HIV检测注意事项● 在所有试验检测中，必须设有内对照和外部对照 质控血清。● 内部对照是质量控制的基础，该质控血清为试剂 盒内提供的阳性和阴性对照血清，每次检测都必 须用同批号试剂盒作内部对照。 ● 外部对照质控血清为实验室设Z的弱阳性对照， 一般以试剂盒临界值的2-3倍为宜。HIV检测生物安全 ―二级生物安全? ?实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用 于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。 包含微生物举例 麻疹病毒 沙门氏菌 乙型肝炎病毒 HIV 血清学检测 衣原体 志贺氏菌HIV检测生物安全 ―二级生物安全?设计和建造的特殊要求消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置等） 洗眼装置 可自动关闭的门锁 门口有发光指示装置 换气装置（3 ～ 4次/小时）HIV检测生物安全 ―二级生物安全特殊微生物操作规程满足一级实验室 (标准微生物操作规程) 各款要求， 在此基础上特别注意?? ? ?制定出入制度实验室人口贴上生物危险标志 制定实验室特定的生物安全操作规则 每年一次最新培训制度 生物危险Ⅱ级HIV检测生物安全 ―二级生物安全特殊微生物操作规程? ?禁止用手处理破碎的玻璃器具。 使用塑料器材代替玻璃器材。?培养基、组织、体液及其它具有潜在危险性的废弃物须放在 防漏的容器中储存、运输及消 毒、灭菌?用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽， 禁止用手直接从注射器取下。? ?用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定 区域消毒，最好进行高压消毒
HIV检测生物安全 ―二级生物安全特殊微生物操作规程?工作人员应进行必要的免疫接种和检测 (如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)? ?必要时收集从事危险性工作人员的本底血清 严格执行实验室工作人员年度采血检测 HIV 抗体和备案 制度。每半年进行一次 HIV 抗体检测，并保留样品?对从事艾滋病实验室工作的人员，因工作中意外事故造成HIV 职业暴露者，所在单位应负责解决抗病毒及其它 相应治疗的医疗费用HIV检测生物安全 ―二级生物安全? ?实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒 人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责 人汇报，并记录事故经过和处理方案?禁止将无关动物带入实验室HIV检测生物安全―二级生物安全安全设施和个体防护?处理以下致病微生物时应在生物安全柜 (Ⅱ级) 中进行 ，包括: 高浓度 大容量有喷溅可能性?上述材料的离心操作如使用密封的离心 机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行。?Ⅱ级生物安全柜必须每年进行一次年度 现场检测。HIV检测生物安全―二级生物安全安全设施和个体防护?当微生物的操作不可 能在生物安全柜内进 行时，须使用面部保护装置?应有相应的SOPHIV检测生物安全 ―二级生物安全安全设施和个体防护?在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤 或丢弃。?当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如可 能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得 戴着手套离开实验室，工作完全结束后方可除去手套。 一次性手套不得清洗和再次使用。样本的转送和发放生物危险Ⅲ级?样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，除特殊 需要外，一般不能用全血。?且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的标记。 清楚地标记为感染性材料（按所在生物安全防护实验室的级别标明相同 的级别）。 感染性材料必须放在密闭的管子中，再放入含有足够吸水材料的生物危 险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于 消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质，以免破碎，容器外 表有HIV检测专用字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容 器应至于4℃以下转运?第一道包装加入吸水层第二道包装外包装防渗漏包装HIV检测生物安全―三级生物安全?实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物 及其毒素。通常已有预防的疫苗。?包含微生物举例 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌鼠疫杆菌Q热病原体 澳大利亚立克次氏体炭疽杆菌HIV (血清学检测除外) 加拿大立克次氏体人类嗜T细胞病毒? ?RNA肿瘤病毒 HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ在电镜下呈球形: 核衣壳：核心：RNA与逆转录酶； 衣壳：含有P24和P18两种结构蛋白； 包膜： 刺突：糖蛋白 (gp120)，能与细胞表面 的CD4分子结合。HTLVgag、pol、env 3个结构基因，功能与HIV 基本一致 ? tax、rex 2个调节基因，除有增加病毒基因 的转录和调节病毒基因产物表达作用外， 尚能激活细胞IL-2基因和IL-2受体基因作用 ? HTLV-Ⅰ型和Ⅱ型的基因组同源性约50%?HTLV―致病性成人T细胞白血病(adult T-cell leukemia,ATL) ：HTLV-Ⅰ型引起，多为40岁以上成人发病。TC大 量增生，转化、癌变，淋巴结及肝、脾肿大，并发高钙 血症、皮肤红斑、皮疹、结节等，预后不良。 HTLV-Ⅰ型相关脊髓病 及热带痉挛性下肢轻瘫 ： HTLV-Ⅰ型引起，因两者相似，故总称HAM／ TSP。HAM女性居多，主要症状为慢性进行性步行障 碍与排尿困难，有时伴有感觉障碍。用激素和IFN治疗 可缓解。HTLV―致病性传播途径：水平传播：可通过输血、注射、性交等方式； 垂直传播：通过胎盘、产道和哺乳等途径在母婴间。HTLV―微生物学检查法病毒分离与鉴定采取患者新鲜外周血分离淋巴细胞，经PHA处理 后，加入含有IL-2的营养液继续3～6w，然后用电镜 观察细胞中的C型病毒颗粒，并检查细胞培养液上清 的逆转录酶活性，最后用免疫血清或单克隆抗体进行 病毒鉴定。抗体检测1.ELISA法 用HTLV-Ⅰ/Ⅱ病毒作抗原，加患者血 清孵育后再加酶标记的抗人IgG抗体，加酶底物视其是 否显色来检测HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体。 2. 间接免疫荧光法 以 HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染的 T 细胞株 作靶细胞抗原制成细胞涂片，加患者血清孵育后再加 荣光素标记的抗人IgG抗体，在荧光显微镜下检测患者 血清中的HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体。 此外，尚可用胶乳凝集法(PA法)及免疫印迹法(WB 法)检测。后者可测定患者血清中病毒结构蛋白的抗体， 常用于HTLV-Ⅰ/Ⅱ病毒抗体检查的证实试验。
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