western 葡萄糖转运蛋白glut44一抗,二抗怎么配置

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-06-09 07:32 标签： western blot抗体选择
western 一抗,二抗以及显色实验步骤_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
western 一抗,二抗以及显色实验步骤
上传于|0|0|暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用1下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢|/|/|/|/|/|
//|//|//|//|//|
【求助】western blot 一抗和二抗的来源必须相同吗
一抗和二抗来源必须相同吗？我的一抗是人免疫兔得到的，二抗是抗鼠的，能做出曝光的结果吗？我几次做没结果，这是否是主要原因？请各位高手指教，急！！！一抗是兔源，二抗就应该是抗兔的，来源可以是山羊、牛等等其他动物的。用抗鼠的二抗不会得到你要的结果。
您的位置： &&Western&Blot为何标记二抗而不是一抗？
如果一抗上直接加标记，不但不能保证抗体抗原反映的特异性，也不能保证实验的可重复性。
首先，由于抗体都是人工去设计的，对于一个人工设计的蛋白质来说，你可以设计一个很好的抗体与他结合；然而对于天然蛋白质，你不能保证一个很高的识别率和准确度。所以，针对1抗，我们可以设计出完美的2抗，然而针对原蛋白质，你无法设计一个特别完美的1抗。所以，直接标记1抗的出来的结果是不准确的，而标记2抗是相对于1抗直接标记来说更准确的，所以经过大量的实验之后人们抛弃了直接标1抗的方法。当然，标2抗也不是完全完美的，当然你也可以标3抗，4抗，不过那个成本就指数上升了，在保证一定的置信度的情况下，人们一般标到2抗就够了。
其次，对于同一个抗原，不同来源的1抗所识别的位置可能会有很大差异。这样，你就无法保证试验的可重复性。而1抗作为抗原来讲，可以将它的抗原决定簇设计的一样，这样针对不同的1抗，2抗是可以保证差不多一个样子的。而且这也给节约成本和方便标记带来了方便。
所以一般现在都是2步标记，第一个原因是主要的，第二个原因是次要的。
参考：/question/.html
已投稿到：
以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。产品分类当前位置：>>>>>详细信息碧云天生物技术研究所地址(Address):联系电话(Phone):800-8283301传真号码(Fax):2邮箱(Email):官网(Website):黄页(Yellow Pages):Western一抗二抗去除液品牌：货号：P0025规格：250ml销售状态：正常原价：0 元促销价：储存条件（Storage Condition）室温保存，一年有效。用法说明（Usage notes）使用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶 ，任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。为取得最佳效果，推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。使用ECL、BeyoECL等类似的化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的 Western检测，例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。产品分类（Product Category）Blot洗脱缓冲液(Blot Wash Buffers)Western一抗二抗去除液(Stripping buffer)，用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱。但是，本Western一抗二抗去除液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约15-20分钟即可实现蛋白膜的重复使用，然后可以进行封闭等后续的Western操作。碧云天生产的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。关于Western一抗二抗去除液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：/stripping-buffer.htm；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。生物产品库能够提供碧云天品牌的 P0025, Western一抗二抗去除液 250ml正品行货渠道信息、促销信息等。全球800个知名生命科学品牌，全国5000家经销商尽在生物产品库！碧云天由在哈佛大学工作和学习的留学人员创办，由国内中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所，浙江大学，国外哈佛大学，麻省理工学院等多名工作在第一线的生物，医学和化学方面的专家提供技术支持。 碧云天依靠自身一些世界领先的技术和理念，以世界一流的技术支撑阵容，研究开发了一系列分子生物学，生物化学和细胞生物学方面的试剂、试剂盒，并提供一系列相关的技术服务。为中国的生命科学事业赶超欧美，提供了重要的基石。 碧云天将依靠自主研究开发的高技术高质量和有绝对的价格竞争力的产品，立足国内，面向世界。力争打破国外大公司在生命科学领域对高技术试剂和试剂盒的接近垄断的地位，为中国在生命科学的这一领域占领一席之地。 非常感谢您对碧云天的关心和支持，碧云天愿与您携手为中国的生命科学事业的腾飞贡献一份力量。 如有任何问题和建议请和碧云天联系()。生物帮站内所有产品仅限于生命科学实验室科学研究使用，不得用于临床诊断及药物治疗。

我要回帖

更多关于 western blot抗体选择 的文章

 

随机推荐