您所在位置： &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
小分子多肽化合物CMS010.26对家兔Masugi肾炎的治疗作用及其机制探讨分析.pdf 99页
本文档一共被下载：
次 ,您可全文免费在线阅读后下载本文档。
下载提示
1.本站不保证该用户上传的文档完整性，不预览、不比对内容而直接下载产生的反悔问题本站不予受理。
2.该文档所得收入(下载+内容+预览三)归上传者、原创者。
3.登录后可充值，立即自动返金币，充值渠道很便利
需要金币：150 &&
你可能关注的文档：
··········
··········
天津医科大学硕士学位论文小分子多肽化合物CMS010.26对家兔Masugi肾炎的治疗作用及其机制探讨姓名：李晓燕申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：卢奕英文嫡略词表acidAAArachiclonic藏生圈繇酸factorbFGFBasicfibroblast基础纤维母细胞生长因子growthureaBUNBloodnitrogen血尿素氮CRCreatine瓤爵FNFibronectin纤维连接骚舀basementmembrane肾小球基底膜GBMGIomerularGNGlomerulonephritis肾小球肾炎GS珏，PXGlutathione谷髓首默过载纯甥酶peroxidaseICImmuNe免疫复合镑complexICAM．1Intercellularfactor-l细胞间粘附分子一1stimulatingILInterleukine白细胞介豢lP．10IFN．inducedIFN诱导蛋囊～10protein-10LNLaminin层粘连蛋白LPOperoxidation脂质过氧化物LipidLTLeukotriene白三烯MCP—lchemoattractant擎菝绸魏憋纯蟹叁一lMonocyteprotein-1MDAMalondialehy如丙二醛MIFfactor巨噬细胞移动抑制因子inhibitoryMacrophageMoMacrophage巨噬细胞涮Nephrotoxicnephritis弩毒盎漶·陡鬻炎PAFfactor血小板活化因子growthPlatelet—activtingnuclear增殖细胞核抗原PCNAcellantigenProliferatingfactor血小板衍生生长因子PDGFPlatelet-derivedgrowthPGPmstaglandin蔫霸骧素PLA2A2磷脂酶A2PhospholipaseROSReactivespecies活性氧oxygenSoDdisumtase超氧{乏物歧化簿Superoxidefactor-§转化生长躐予一13TGF一§Transforminggrowthinhibitors基质金属鬣白酶抑制剂-lTiSSUeofmatrixTIMP．1metalloproteinase-Ifactor肿瘤坏死因子一。necrosisTNF一ⅡTumoralphaThromboxane盘拴素A2{XA2A2摘要蕊察小分子多躲CMS010，26疗效及瞪静；建立家受Masugi鹜炎援罄其作用机制。蠢淡：驳家兔氍发鼹免疫苇，获褥羊抗兔肾戍斌抗血瀵，摸索竣邋逑模撬受鬻皮矮盘瀵穗墩，建立家受Masugi瞥炎壤登。造模矮，隧辘分为：fo．Img／kg／d)、生憨舷求缱及正誊对照缰。除匿露对照缓外，务缀耳缘势脉注射抗瞧潺§。5rot／次，镣半，l、露1次，共4次，歪鬻对照缝注冀重稚阉裁鳖蠢鬻羊血潢。次日各缎开始鲜缘静脉绘药，正常对照缎不予任侮处理。每周梭测家兔24h尿蛋白、照灞飘酹(e釉、藤素氮(BUN)含量。逡摸28天爱，处死动锈，邂行臀缝级瘸理学鼹察(毽捂HE染镪、免疫荧光、魄镜)；趣瀵及臀皮腰蕊=二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)测定；肾切片巨噬细臌免疫缌亿染色。同辩残察CMS010。26辩健廉夺蔽免痰功能的影确。尿蛋囱及mBUN、CR升高幅度小，有下降趋势，病理观察新月体很少见。2。0ml苹撬受鹜发袋敷渣注魅缎，24h尿蛋白歉藏BUN、CR嚣离幅凄较大，明疆离予讴常对照缀；病理麟察瞥小球内缓藏数增多，毅周体形成较多，簿小管腔内可见管型，肾小球、翳小管均有炎性细脆没润，与人类薪月体性姆小球鹭炎浚变撩戳。3。2ml羊撬魏鹜发展患瀵注鸯重组，24h艨鬃自及照BUN、CR大瞩度于}嵩；瘸遴表现为大鄢分瞥，』、球囊靛闭塞，浅瀵纤维任，缨聪罐生较多，肾小管腚内管型多见，大赞炎细臌没澜，3只中1只于实验结荣前死亡，琵亡率较蕊。4．0ml羊蒎受鹭疫溪抗纛潺注麓组凌褪掰蠲内全都梦￡亡。免疫荧光绪粱显示，l+2ml羊抗兔鹜皮壤血清注羹重组羊IgG、兔IgG浴l鼯小嫁受igG滋GBM绫滋淡积较多；霹+0rot苹抗受鹜绽藤盎清注瓣缀动物鬓亡，寒做兔疫荧光染色；斧常对照GBM无羊IgG、兔IgG沉积。确定2．0ml为建立茸彝剂量组24h尿蛋臼篇l周开始即低于生理盐水组，第3、4周时更明懿；血BUN各期均明显低于生理盐水缎；盘CRCMS010．26高、低剂量缎第2周开始仅商轻微秀蔫，明显低予叟邋麓永组；HE染色见弩小球薪胃体形藏明显少于生理盐水组，肾小球肿大穰度、肾小球内细胞数明最少于生理盐水组；免疫荧光量羊IgG、兔IgG浍GBM沉积均较生理盐水组少；电镜见GBM水|矜、不规剐增厚毅鬣自沉积程度氇明显减轻。(3)捧孀梳制：巨噬缨稳浸润较生理盐水少：
正在加载中，请稍后...请问宠物用的无菌稀释水可以用生理盐水代替吗？【拉布拉多吧】_百度贴吧
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&签到排名：今日本吧第个签到，本吧因你更精彩，明天继续来努力！
本吧签到人数：0成为超级会员，使用一键签到本月漏签0次！成为超级会员，赠送8张补签卡连续签到：天&&累计签到：天超级会员单次开通12个月以上，赠送连续签到卡3张
关注：435,768贴子：
请问宠物用的无菌稀释水可以用生理盐水代替吗？收藏
快试试吧，可以对自己使用挽尊卡咯~◆◆
昨天是我家宝宝打最后一针疫苗，护士直接就拿无菌稀释水打了，忘记配进药里，宝宝会有事吗？还用不用补打？？
可以补打，医学上打疫苗都是将疫苗混在生理盐水里打的，忘了给药只是等于打了一针盐水而已，不会产生什么危害的。
登录百度帐号推荐应用过氧化物酶增殖物激活受体-γ在大鼠肾脏组织衰老过程中的表达变化及其与氧化应激的关系_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
过氧化物酶增殖物激活受体-γ在大鼠肾脏组织衰老过程中的表达变化及其与氧化应激的关系
上传于|0|0|暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用0下载券
想免费下载更多文档？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩2页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢联系电话：6
免费客户服务电话： 电子邮箱：
神威药业集团有限公司版权所有&
&&Copyright 2009 &&All&Rights Reserved 互联网药品信息服务许可证(非经营性)证书编号：（冀）-非经营性-　　　　　　　　　
您现在的位置：&&>&&>&&>&&>&正文
浅论骨髓间充质干细胞在梗死心肌移植再生后nesprin蛋白表达的实验研究
来源：　 15:34:00　【】　
&&&& 作者：杨文钢, 薛松 &汪铮, 连锋, 徐根兴 刘沙 黄日太, 朱洪生, 张谷兰【摘要】& 目的： 研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植到急性心肌梗死区心肌样细胞再生后nesprin蛋白的表达情况。方法: 大鼠16只,随机分为实验组和对照组,每组8只。利用密度梯度分离法和贴壁培养MSCs,流式细胞仪检测MSCs表面相关抗原、DAPI标记MSCs备用;SD大鼠开胸手术结扎心脏冠脉左前降支建立心肌梗死模型,并在实验组梗死区注射MSCs,对照组注射DMEM;术后3周取梗死区心肌,利用免疫细胞学化学方法鉴定肌节肌动蛋白和肌钙蛋白的表达,免疫荧光技术和蛋白质印迹鉴定nesprin蛋白在MSCs移植后的表达。结果: MSCs移植到梗死缺血区3周后可以用DAPI示踪、并有心肌细胞特异蛋白呈阳性表达;免疫荧光和蛋白质印迹鉴定在MSCs移植前后有nesprin蛋白的表达,移植后出现nesprin蛋白表达量的增加。结论: MSCs在梗死心肌内移植具有分化再生的能力,nesprin蛋白在MSCs移植后出现表达量的增加,可能在MSCs分化为心肌细胞样过程中起到一定的作用。 【关键词】& nesprin蛋白; 间充质干细胞; 细胞移植; 心肌细胞再生　　[Abstract] Objective: Identify the differentiation of rat bone mesenchymal stem cells(MSCs)into myocardiumlike cells after MSCs was transplanted into acute myocardial infarction.Then, identify the expression of nesprin protein. Methods: Sixteen SD rats were randomly divided into experimental group (n=8) and the control group (n=8).MSCs were isolated and purified from the bone marrow of rats by density gradient centrifugation and adhering to the culture plastics. Surfaceassociated antigens of MSCs were detected by flow cytometry. These cells were labeled with DAPI. SD rats were anesthetized, through thoracotomy,then ligated the left anterior descending coronary artery in order to establish model of myocardial infarction. The DAPI marking MSCs were injected into the infarcted area in th DMEM was used in the control group.The expression of αsarcomeric actin, troponin I were studied by immunocytochemistry three week later when MSCs were transplanted into acute myocardial infarction. The expression of nesprin protein in MSCs was identified by immunofluorescence and westernblotting before and after transplantation. Results: MSCs can be traced by DAPI three weeks later when MSCs were transplanted into the infarcted ischemic area. The expression of αsarcomeric actin and troponin I were positive in MSCs three weeks after transplanting into the infarcted ischemic area. The expression of nesprin protein was positive in MSCs by immunofluorescence and westernblot whenever MSCs were transplanted or not. But, three weeks after MSCs were transplanted,the expression of nesprin protein in the infarcted ischemic area was higher than that of DMEM was used in the infarcted ischemic area. Conclusion: This study suggests that MSCs were capable to differentiation with subsequent myocardial regeneration,after being implanted into the
the expression quantity of nesprin protein was higher after MSCs were implanted. When MSCs are differentiating into cardiac myocytelike, nesprin protein may play a role in this procession.　　[Key words] me
cardiomyocyte regeneration　　Nesprin蛋白是一种细胞核膜蛋白质,在很多组织均有表达,其中以骨骼肌、心肌和血管平滑肌表达较高;研究发现其除了在细胞的有丝分裂、RNA的复制转运、细胞核膜的稳定性方面起着关键作用外,在细胞的分化中可能也起到相关的作用[1,2]。Nesprin蛋白的缺失将导致相关性疾病的发生，如扩张性心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)、埃德二氏肌营养不良(EmeryDreifuss muscular dystrophy,EDMD)等遗传性疾病,影响细胞骨架组织和动态平衡,将引起细胞骨架刚性的丧失,或者导致细胞的过早成熟老化。Nesprin蛋白的研究对治疗一些以肌肉和心血管系统为表现的遗传疾病有重要意义。　　心肌在缺血损失后表现为功能不全或者严重心功能衰竭，虽然药物和外科手术可以缓解病情，改善组织缺血,但无法改变取代受损的心肌细胞。通过移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)到缺血心肌组织可以分泌多种因子，如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等改善心功能,代替受损心肌细胞[4,5]。我们建立大鼠急性心肌梗死模型,将体外分离提取、培养及4′,6二脒基2苯吲哚盐酸(DAPI)标记的MSCs经局部注射移植入梗死心肌区域内。观察MSCs在梗死心肌移植后的分化情况,同时对nesprin蛋白进行鉴定,为临床细胞移植治疗心脏疾病打下理论基础。　　1 材料与方法　　1.1 实验动物　　健康SD大鼠16只,体质量250～300 g,由上海交通大学医学院动物实验中心提供。随机分为实验组和对照组,每组8只。　　1.2 主要试剂和仪器　　LDMEM培养基、特级胎牛血清FBS、0.25%胰蛋白酶和EDTA(Gibco公司);密度为1.077的Ficoll(GE公司);荧光标记抗鼠CD45FITC、抗鼠CD90PE(eBioscience公司);抗鼠CD29APC(BioLegend公司);抗鼠心肌特异性肌钙蛋白I(TnI)抗体、抗鼠肌节肌动蛋白、兔抗大鼠nesprin蛋白抗体(Abcam公司);Triton(Amresco公司);牛血清白蛋白BSA(Proliant公司);细胞分离液(Gibco公司);荧光标记山羊抗兔LgG(Abcam公司);Trizol(Invitrogen公司);BCA 试剂盒(碧云天公司)。倒置荧光相差显微镜(Olympus公司);FACSca流式细胞仪(Becton Dickinson公司);垂直电泳仪(GE公司);半干转膜仪、硝酸纤维素膜(BioRad公司);ECL发光剂(GE公司);柯达活体成像仪cymentre2000(Kodak 公司);无菌DAPI 储存液 (Sigma公司);动物小型呼吸机(浙江动物实验仪器厂)。　　1.3 MSCs的分离和培养[6-8]　　密度梯度离心贴壁培养法:引颈处死SD大鼠,75%乙醇浸泡,无菌条件下取股骨和胫骨,在无菌皿中,用LDMEM反复冲洗骨髓腔;利用密度梯度离心法分离MSCs。含LDMEM,20% FBS,100 U/ml氨苄西林的培养液悬浮获取细胞,调整细胞浓度为2×106/ml后,25 cm培养瓶、37 ℃ 5%CO2细胞培养箱培养。3～4 d后首次换液,去除不贴壁细胞,以后每2～3天换液1次,倒置显微镜下观察细胞贴壁及生长情况,待细胞长满至瓶底面积的80%～90%后,用0.25%胰蛋白酶常规消化,按1∶3比例传代培养。第2代的MSCs用来实验研究。　　1.4 MSCs的特征性抗原的鉴定　　取第2代MSCs,细胞分离液消化,被测细胞浓度用含1%FBS的PBS缓冲液调节至1×106/ml,吸取50 μl标本,加入抗大鼠CD45FITC、CD90PE和CD29APC各10 μl,对照未加抗体;4 ℃暗环境孵育30 min。PBS洗2遍后加入0.5 ml PBS将细胞打匀,应用流式细胞仪检测MSCs表面抗原CD45、CD90和CD29的表达情况。　　1.5 DAPI标记细胞　　第2代的MSCs 80%～90%融合时,移植细胞当天将无菌的DAPI储存液加入培养的MSCs培养液中,至终浓度为50 mg/L,37 ℃孵育染色至少30 min。细胞至少用PBS平衡盐溶液冲洗6遍以除去未结合的DAPI。离心收集细胞,用无血清的DMEM悬浮,移植所需细胞数为3×106,置于冰上备用。　　1.6 动物模型的建立及细胞的注射　　通过结扎冠脉左前降支建立急性心肌梗死模型。将动物注射10%水合氯醛(0.4 ml/100 g)麻醉后固定在手术台上,用笔型静脉置留针进行气管插管接呼吸机(呼吸频率85次/呼吸比1∶1;潮气量18 ml),胸部剃毛、乙醇棉球消毒,在左胸3～4肋间逐层进胸,在左心耳与肺动脉圆锥下1～2 ml左右找血管,穿70号线,拉紧丝线,形成心肌缺血,观察线扎紧的部位上下范围的心肌有发白,手术完成关胸。梗死模型以组织病理学验证。心肌梗死1周后注射MSCs,使用30 G针头、1 ml注射器把用DAPI标记的细胞0.3 ml(3×106个细胞)分3点注射到心肌梗死区内,对照组使用等量未含细胞的DMEM。　　1.7 心肌梗死的病理学检测　　模型成功后将大鼠脱颈处死,打开胸腔,将心脏剪下,用生理盐水将心脏清洗干净并排出心脏内的淤血,分别用刀片将心脏切成1 mm厚的切片,放入0.1%的2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)磷酸盐缓冲液(pH 7.4),37 ℃水浴7～10 min,取出切片用生理盐水冲洗数次,观察结果。苏木精伊红(HE)染色按步骤进行。　　1.8 组织免疫荧光化学检测　　3周后处死动物,取出心脏,取梗死区组织进行冰冻切片(8 μm/张)，在荧光镜下观察到有DAPI标记的细胞存在,并进行相应部位免疫荧光染色检测肌节肌动蛋白和nesprin蛋白的表达。将冰冻切片放入4 ℃酮内固定10 min,晾干后,用0.01 mol/L,pH7.4的PBS冲洗切片3×3 min,再用0.1% Tritonx100处理15 min PBS漂洗切片,使切片保持一定湿度。0.03%过氧化氢/甲醇封闭内源性过氧化物酶20 min(25 ℃;1% BSA室温孵育30 min 后加入各种蛋白抗体4 ℃过夜;第2天,加荧光标记二抗,25 ℃孵育60PBS漂洗3×5取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。立即用荧光显微镜观察(实验过程避光操作)。观察标本的特异性荧光为阳性反应。对照组取相同部位梗死组织,操作均同,以供对照。　　1.9 蛋白质印迹鉴定nesprin蛋白的表达情况　　收集MSCs组和DMEM组心肌梗死区组织检测nesprin蛋白,提取蛋白, BCA 法测定蛋白质含量。参照分子克隆实验指南进行纯化蛋白的SDSPAGE。SDSPAGE电泳、转膜、封闭后加入1∶1 500稀释的抗neprin多抗(用TBST稀释),4 ℃反应过夜。加入羊抗兔IgGHRP (TBST稀释 1∶5 000),室温作用2 h,TBST漂洗,加入ECL显色液,置于柯达活体成像仪中观察结果,条件设置为曝光5 min,CCD自动获取图片结果。相应蛋白表达值为条带的灰度值除以β肌动蛋白(1∶1 000， 43 ku)内参照校正。　　1.10 统计方法　　使用Image Programer软件对图片进行分析,利用GraphPad Prism 5 Demo和SAS v6.12软件进行相关统计学分析,所得数据用均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验,实验进行3次。1&&&
文章责编：gaoxiaoliang&　看了本文的网友还看了
?&&( 13:37:00)?&&( 13:19:00)?&&( 13:17:00)?&&( 13:16:00)?&&( 13:16:00)?&&( 13:15:00)
? ? 　 ? ? 　 ? ? 　 ? ? 　 ? ?
? ? 　 ? ? 　 ?
? 　 ? ? 　　 ? ? 　 ? ? 　 ? ? 　 ? ?
? ? 　 ? ?
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　 |
| 　　　　　　 |
　　　　　　
| 　　　　　　 |
　　　　　　 |
| 　　　　　　 |
实用工具 |
| 大全 | 大全　　　　 |
版权声明：如果网所转载内容不慎侵犯了您的权益，请与我们联系，我们将会及时处理。如转载本内容，请注明出处。
Copyright & 2004-
　网　All Rights Reserved　
中国科学院研究生院权威支持(北京)　电 话：010-　传 真：010-