此外我们调查人员记录了许多关于修改数据的案例，他们都没有解释为什么修改这些修改包括改变积分参数或者偅新标定峰以至于原来峰的分离度不能进行积分和杂质计算。

act.还有一些其他情况我近期总结了关于一个色谱数据系统（CDS）在数据造假中嘚作用的质量问题专栏。在这里有什么法规指南能够帮助我们我们在关注相关积分手册和法规指南之前需要先了解一些色谱积分的基础問题。这样做的理由很简单：如果正确设定积分参数和可接受的色谱图那么一些情况就没有必要进行手动重新积分。但是我们需要承認在检测运行期间色谱系统的特性是动态的和分离是可变的，因此正确全面的设定积分能起到平衡的作用 subject.监管者对手动积分规程的要求昰错误的。这些要求对色谱积分的标准操作规程（SOP）而不是手动积分的要求，手动积分是另外一个重要分支虽然专栏的焦点是手动积汾，但是我们要比较全面的来看待问题因此我们将不讨论适用于标定样品定量分析使用的各种校验方法，也不去关注类似的数据转化因為这些已经在之前的质量问题专栏中提到过了此外我们也将不考虑系统适用性（SSTs）的使用，因为已经再其他期的专栏中讨论过了.本文强烮推荐去阅读Hill

same.之前我们讨论如何控制和管理手动积分这对于色谱积分本身基础的理解是十分重要的。对于积分这个课题最好的书是Norman Dyson 的著莋在1998年已经发行了第二版，它仍旧使用如果你想了解色谱积分强烈推荐这本书。关键积分参数在表1中列出并且一些重要的部分在下媔进行了讨论。值得注意的是不同的CDS供应商对他们的参数有不同名称但是功能的本质是相同的。

对于峰值采集和测量CDS积分的关键参数

当檢测器用一个类似于数字转换器（A/D）的装置开始输出信号时色谱积分开始在CDS中积分的方法确定了检测器收集频率和分析运行时间。依靠CDS积分方法或处理方法将自动应用于峰面积或高度的计算积分。处理方法包括对目标峰的鉴别和期望在界面中的洗脱时间这些数据文件囷解释组成了分析的原始数据和最初记录。我们将讨论在下一个质量问题专栏中讨论最初记录的定义根据MHRA发布的数据完整性指南。

采样率和超过阈值角是积分的两个最重要参数结合他们两个决定了峰测量，但抑制噪声能够使峰得到更好的测量

width）和采样率的设定控制检測器采样的输出频率，并对峰面积测量的准确度有直接影响如果采样率太慢，可能导致积分不到小的洗脱峰和两峰之间的低谷相反，呔快的采样频率会被CDS软件中的数据聚束所管制一般情况下，至少20-30次采样才能准确的积分例如，传统HPLC一般要求0.5-1HZ的采样率快速毛细管气楿GC的采样率范围5-20HZ，UHPLC的采样率范围是20-50HZ.大多数在CDS中的A/D中的采样率上限是100HZ.

• threshold）设定用于辨别一个峰在基线噪音上开始和结束它根据当检测器发出夶于以上预定值的信号时发生频率的改变在积分方法中由于峰的开始或峰底部下滑的情况。他需要小心设定如果不小心基线被检测成噪喑，然后噪音被检测成峰；如果设定太大积分将可能错过小峰因为阈值没有响应到。相同的程序也可能发生在峰底部如果阈值设定太低，就有太多的峰尾被记录相反如果阈值设定过高，峰会很早结束峰面积会被低估。

• 一旦峰被检测到下一个步骤就是确定它何时结束一般情况下信号会返回原来峰开始时的基线位置，但是如果有几个峰洗脱或者基线上升信号将不能返回到原来的基线位置。因此基线漂移公差确定了基线能够漂移原来位置有多远这是以超过阈值角为参照，它确定基线能漂移多远

在Dyson’s book 中有详细的讨论，我们能够开发絀色谱积分的三个基本原则：

• 原则1：不使用系统默认的积分参数确定每个积分参数被设定为适应单独的分析程序，不能用一个放之四海洏皆准的方法对于Beer?Lambert定律，样品和标准品必须连续积分否则吸收度与浓度的对比不能执行。

• 原则2：CDS的功能不能弥补你方法的缺点许哆实验室中有一个信条，CDS能用于弥补分析方法的缺陷其实事实并非如此。健全和经过验证的方法能减少或消除这一问题

• 原则3：理解CDS发苼了什么的事情。因为从CDS中得到一些不明信息但是你必须相信他的结果。所以只有用眼睛去看观察用脑子去思考例如，观察积分代码（BB 或 BV)：这是预期的吗基线应该在什么位置，希望他们在什么位置是否保留时间和峰的形状是否始终如一在运行中？

用手动积分来进行數据造假的情况正在增加但是主要有两种途径：

• 峰值消减-手动设置基线来减少峰面积在积分中增加样品的分析数值（近标准品面积被消減）或者减少分析报告的数值（通过消减样品的峰面积但不减少标准品的面积）。在图2中第一个洗脱峰被进行了手动调整同减少总的峰面積

• 峰面积增加-在积分过程中调整基线增加峰的面积。增加样品的峰面积多于标准品的面积从而增加样品的计算数值。如果需要减少僅增加标准品的峰面积。图2中line3显示了怎样增加色谱图中的第二个洗脱峰。

图2： 峰面积增加和消减的例子

另外检查官和审计人员应该关紸一些非法手动积分的相关因素：

• 发现一些手动积分没有追踪和不可读。色谱工作人员应该能演示获取相同的结果如果数据文件来源于一個重新处理的序列-如果不能获取一个警告就应该出现。检查官发现CDS的审计追踪系统已经临时关闭就可能伴随造假了。

• 电子数据不可用因为原始数据和电子记录已经被删除或不能被重新加工而没有留存，这个结果一旦证实造假的问题就出现了，并且实验室符合度随之丅滑至谷底

• 相同运行中标准品和未知样品设定不同的积分参数或者在批分析过程中重复进样未知批的相同样品。

• 在系统中关掉审计追踪幾分钟后再次开启提示：改变了什么不被记录的意图

我认为，这需要法规监管部门发布一个关于GMP手动积分主题的指南但这是特别缓慢嘚。说不定可能会到下一个冰河世纪但是有一个地区已经对手动积分做了行动，这就是药品注册时临床和非临床研究的样品生物分析Bioanalytical Regulatory Guidance

苼物分析法规指南中的重新积分

Validation ，在这个部分中关于处理日常样品检验的重新积分观点如下：

• 应该建立一份关于样品数据重新积分的SOP或指喃

• 在SOP或指南中应该说明重新积分的原因，并说明如何进行了重新积分重新积分的原理应该被清楚的描述和记录。

• 初始和重新积分的数據都应该被报告

在后来的文档中在日常研究的报告章节，有另外一个文档Reintegrated Data 要求如下：

• 重新积分的申请者和管理者授权后才能进行重新積分。

• 临床和临床前样品的重新积分只能在预先指定的SOP下进行操作

在2013年，FDA发布了对工业生产的指南修改起草版本样品数据积分进行了哽新（但是请注意现在这个指南依然是起草版本），但是关键的要求没有进行本质的改变是对以上文件的重新整理文件，除了增加了审計追踪的在CDS中的保留部分At last we are getting

最终我们将去往哪里！ 我们现在虽然有一些GLP (good laboratory practice)。但是还需要更多美国和EMA发布了他们自己的指南对生物分析方法驗证 in 2011。在5.5章节涉及到了积分：

• 色谱积分和重新积分应该在SOP中进行描述

• 所有偏离SOP的偏差都应该在分析报告中讨论

• 色谱积分参数和重新积分的凊况初始和最终积分数据都应该在实验室进行记录并且经过申请。

虽然FDA和EMA允许进行色谱的重新积分他必须在可控的条件下进行并且必須在最终报告中体现，并且在授权的情况下进行原始数据和重新积分的数据在审计追踪中可以查到，并且进行了说明就个人而言，我哽喜欢欧洲的指南因为FDA太过官僚。在这件事情上是个例外FDA要求申请和管理者授权的文件可以在CDS之外，因为目前CDS还没有这个功能可以使鼡如果监管者要求，将来的色谱数据系统可能会包括这个功能


GMP办公室翻译组译者：好累校对：Owen