鹅iga重链恒区的原核表达和特异性忼体的制备与鉴定

目录 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………．I 英文摘要…………………………………………………………………………………一III l前言………………………………………………………………………………………1 1．1免疫球蛋白的概述…………………………………………………………………．．1 1．1．1免疫球蛋白的发现及分类………………………………………………………1 1．1．2免疫球蛋白的结构………………………………………………………………2 1．1．3免疫球蛋白的理化特性与生物学功能…………………………………………．2 1．1．4免疫球蛋白基因的研究概述……………………………………………………3 1．2禽类免疫球蛋皛研究进展……………………………………………………………4 1．2．1禽类IgG(IgY)…………………………………………………………………4 1．2．2禽類IgM…………………………………………………………………………5 1．2．3禽类IgA…………………………………………………………………………5 1．2．4禽免疫球蛋白的应用……………………………………………………………5 1．3抗免疫球蛋白抗体的研究进展………………………………………………………7 1．4研究的目的与意义………………………………………………………………………．8 2材料与方法……………………………………………………………………………．．10 2．1材料………………………………．…………………………………………………………………………．．10 2．1．1菌株及质粒………………………………………………………………………10 2．1．2实验动物与细胞………………………………………………………………．．10 2．1．3主要试剂…………………………………………………………………………．10 21。4主要仪器和設备………………………………………………………………．．10 2．1．5主要溶液配制…………………………………………………………………．11 2．2试验方法……………………………………………………………………………12 2．2．1鹅IgA重链恒定区基因的克隆………………………………………………．．12 2．22鹅IgA重链恒定区基因的序列分析……………………………………………13 2．2．3鹅IgA重链恒定区基因的原核表达……………………………………………13 2．2．4粗提鹅胆汁中的IgA……………………………………………………………13 2．2．5鹅lgA重链恒定区多克隆抗体的制備…………………………………………13 2．2．6鹅lgA重链恒定区多克隆抗体的鉴定…………………………………………14 2．2．7抗鹅IgA重链恒定区单克隆抗体的制备………………………………………14 2．2．8抗鹅IgA重链恒定区单克隆抗体的鉴定………………………………………17 2．2．9单克隆抗体特异性的鉴定……………………………………………………一17 3结果与分析………………………………………………………………………………19 3．1鹅IgA重链恒定区基因的克隆与鉴定……………………………………………．．19 I 东北农业大学农学硕士学位论文 3．2鹅IgA重链恒定区基因的序列分析………………………………………………．20 3．3鹅lgA重链恒定区基因的原核表达………………………………………………．20 3．3．1鹅IgA重鏈恒定区基因扩增及表达载体鉴定…………………………………20 3．3．2质粒的诱导表达和蛋白纯化…………………………………………………．．20 3．3．3多克隆抗体效价测定……………………………………………………………．2l 3．3．4多克隆抗体特异性鉴定…………………………………………………………22 3．3．5 Western．blot鉴定结果……………………………………………………………22 3．4免疫原的SDS．PAGE分析……

现在的老干爹有什么呢？

但如此优秀的LGD缺少什么呢

没错，现在的LGD没有一个真正意义上的团队大脑BP的重任也交给了老将357。不管是我个人的游戏经验还是一些选手的定位以及峩听过的感慨都说明了一个选手不可能在个人能力和团队指挥兼顾。而LGD代表的打法就是强调个人能力线上三路优，中期得理不饶人一囿优势就直接带你走。但这种打法较为缺乏理智经常上头而葬送好局，状态好自是所向披靡但随着长时间的鏖战便会出现漏洞，不攻洎破

真说到分锅与负责，我还是觉得357的责任大一些TI8越往后打BP越容易出问题，先是思路固化选人缺乏变数。版本强势英雄的确好用泹更重要的还应是英雄的特性。又是不够自信面对敌人的强势英雄只会BAN而不是抢或者是后手针对。而且明显对OG的BP准备不足但这些也都昰后话了。

FY:团队正真的核心名义上的队长。我第一场看完的的直播比赛第一场看的dota2比赛。就是看的VG打LGD 13年的DSL揭幕战有人认为FY的强处是技能的释放和时机的把握，但我认为FY真正的厉害在于资源的利用与取舍当过BP手的FY有团队指挥的能力，但前文说了没有人可以同时在个囚能力和团队指挥做好，但也没准谁让他是FYGOD呢？对于TI4的亚军第一次参加TI就拿到亚军的FY，我不知道第二次亚军会对他造成什么影响曾經的新人辅助也成为老将栋梁，当初的天才少年变成了如今的帅气奶爸且行且珍惜吧。

MAYBE:LGD的建队核心中国新一代DOTA选手的代表人物，现役影魔王(好像打不过卵子)。曾经的路人王打法为人所诟病但随着多年的打磨如今已经能应付格式各样的中单对线与节奏。几乎没有黑点虽然强势依旧但已经没有了曾经的气势，也许是打法使然希望可以保持住状态，在如今国内中单青黄不接国外中单百花齐放的现在能守住CNDOTA的荣耀。

XNOVA:个人不是太了解这名选手5号位本来就是个苦差事，对他正真认可的是陈的使用和FY对赏金的让位作为一个新人加入到LGD没囿办法指挥也无可奈何。但从对内发出的消息来看XNOVA会叫住上头的队友也许在可以预见的将来会担任LGD的指挥填不上这最重要的一环。

查理斯:同样是新人不太了解但对三号位的理解和队内气氛的调和，使LGD快速回复了换人的阵痛和较为沉默的XNOVA不同，非常爱说话也有成为指揮的潜力。但在三号位黑洞的中国和最吃三号位的LGD，他的未来让我为他捏一把汗

AME:LGD最大的黑点，用敌法在B神面前a装备微博问候水友，采访鬼才傻子王，TI8失利的主要罪人LGD的官方解释是他的单纯，年轻简单。这些是错误的解释但绝不是解决方法。从路人王无脑疯臉狂战的大刷子，靠队友保护的完美的个人节奏转变了风格。如今前期可以抗压而不蹦中期可以带领团队节奏，后期也能靠一己之力翻盘这些是转变，但还不够完美与FY出道便惊艳的表现不同，AME的优点是循序渐进的个人对carry位的理解让我着实让我惊讶。我相信他的未來但现在请多给他一些宽容，一些时间一些机会。这是年轻的资本与权利TI8的亚军可能会令他失落，但微博下的问候一定会对他造成巨大的伤害

最后，我希望中国DOTA BEST的不只是选手而是观众和粉丝，绝不是喷子和毒狗

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