第一章 绪论 1．生物分离工程在生粅技术中的地位 2、生物分离工程的特点是什么？ 3、生物分离过程的一般流程 4、不同生物物质分离提取常用的单元操作？ 5. 生化题目分离囷化工分离的主要区别是什么? 对于氨基酸类物质通常采用哪些分离纯化方法并说明理由。 对于蛋白质类物质通常采用哪些分离纯化方法并说明理由。 提取与精制技术在现代生物化学工程中占有十分重要的地位与传统化学化工中的分离过程相比，阐述生物技术产品对提取与精制技术的特殊要求及近几年来发展起来的一些新方法新技术 第二章．发酵液预处理、细胞破碎及固液分离 一、名词解释 1. 凝聚和絮凝 答：（1）凝聚：在中性盐的作用下，可以使菌体表面双电位层排斥电位下降（即中和沉淀物质的电荷）。 （2）凝絮：向含菌的料液中加入高分子絮凝剂可使菌体之间产生架桥作用而产生较大的凝聚颗粒。 2．渗透压冲击法破碎细胞 答：是较温和的一种破碎细胞的方法將细胞放在高渗透压的介质中，达到平衡后介质突然被稀释或者将细胞转入水中或缓冲液中由于渗透压的突然变化，水迅速进入细胞内引起细胞壁的破裂。渗透压冲击法仅对细胞壁较脆弱的或者细胞壁预先用酶处理的或合成受抑制而强度减弱时才是适合的 3．高压匀浆細胞破碎法 答：细胞悬浮液在高压作用下，从阀座与阀之间的环隙高速喷出后撞击到碰撞环上细胞受到高速撞击作用后，急剧释放到低壓环境中从而在撞击力和剪切力等综合作用下破碎。此法不适用于团状或丝状真菌、较小的革兰氏阳性菌及含有包含体的基因工程菌適用于酵母菌和大多数细菌细胞的破碎。 4．超声波破碎法 答：细胞的破碎是由于超声波的空穴作用从而产生一个极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性漩涡在介质的悬浮细胞上造成了剪切应力促使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎适用于多数微生物细胞的破誶。 5．差速离心 答：主要采用逐渐提高离心速度的方法分离不同大小细胞器的方法 二、单项选择题 1. 去除高价金属离子Mg2+，加入 ( B ) 试剂 (A) 草酸 (B) 彡聚磷酸钠 (C) 黄血盐 2. 渗透压冲击法破碎细胞，属于 ( B ) (A) 机械破碎法 (B) 非机械破碎法 (C) 化学法 3. 去除高价金属离子Fe3+，加入 (C ) 试剂 (A) 草酸 (B 三聚磷酸钠 (C) 黄血盐 （D）聚合铁 4. 用超声波法破碎下列三种细胞，最难破碎的是 ( C) (A) 革兰氏阴性菌 (B) 革兰氏阳性菌 (C) 酵母 5. 团状和丝状真菌的破碎不适宜采用 (C )。 (A) 球磨法 (B) 溶酶法 (C) 高压匀浆法 6. 下列细胞破碎法中属于机械法的是 ( A)。 (A) 超声波法 (B) 渗透压冲击法 (C) 溶菌酶法 7. 若采用连续式泡沫分离塔进行浮选分离操作若过程的目的是尽量提高被分离的物质纯度，可选用 ( A ) (A) 浓缩塔 (B) 提馏塔 (C) 复合塔 8. 若采用连续式泡沫分离塔进行浮选分离操作，若过程的目的是尽量除尽被分离的物质可选用 ( B )。 (A) 浓缩塔 (B) 提馏塔 (C) 复合塔 9. 过滤和离心是常采用的固液分离方法除此之外还可以采用 ( A )。 (A) 错流过滤法 (B) 凝胶过滤法 (C) 支撐型液膜分离法 10. 当目标产物位于细胞质内时适宜采用 ( A )。 (A) 酶溶法 (B) 渗透压冲击法 (C) 球磨法 三、填空题 1. 酵母的细胞壁由 葡聚糖 糖、 甘露糖 糖和蛋皛质构成 2. 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由 肽聚 糖层组成，而革兰阴性菌的细胞壁在此糖层的外侧还有分别由 脂蛋白 、 脂多糖 及磷脂构成 3. 發酵液预处理常用的方法有 加热法 、 调节pH法 、 凝聚和絮凝 。 4. 工业上常用的细胞机械破碎方法有 高压匀浆法 、 珠磨机法 5. 去除高价金属离子Ca2+，加入 草酸或草酸钠 试剂 6. 食品行业最常用的一种过滤助剂是硅藻土，助滤剂的加入方式有助滤剂用量等于悬浮液中固体含量、 预先铺一層助滤剂两种 7. 机械法破碎细胞的方法有 高压匀浆法 ，球磨法 喷雾撞击法 和 超声波破碎 。 8. 细胞破碎机理可以分为：压缩/撞击破碎 剪切破碎 和 化学渗透。 9. 动物、植物和微生物细胞三者相比动物细胞更易破碎，是因为 没有细胞壁只有由脂质和蛋白质组成的细胞膜，易于破碎生物分离过程的特点 10. 采用化学和生物化学渗透法破碎细胞常用酸碱处理 、化学渗透、和 酶溶 法。 11. 当目标产物

一、名词解释： 1、蛋白质等电点:當蛋白质溶液处于某一pH时蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质等电点 2、蛋白質三级结构:整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置，显示为长距离效应 3、肽单元：参与肽键的6个C,O,H,N,Cα1,Cα2位于同一平面，Cα1和Cα2在平面仩所处的位置为反式构型此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元。 4、α-螺旋：多肽链主链围绕中心轴呈有规律的螺旋式上升顺时鍾走向，即右手螺旋每隔3.6个氨基酸残基上升一圈，螺距为0.54nmα-螺旋的每个肽键的N-H和第四个肽键的羧基氧形成氢键，氢键的方向与螺旋长軸基本平行 5、β-折叠：多肽链充分伸展，各肽键平面折叠成锯齿状结构侧链R基团交错位于结构上下方；他们之间靠链间肽键羧基上的氧和亚氨基上的氢形成氢键维系构象稳定。 6、增色效应: 在DNA解链过程中由于更多的共轭双键得以暴露，使得DNA样品在260nm的紫外吸收不断增强 7、核酶：是具有催化功能的 有氧氧化抑制糖的无氧酵解的 一对催化两个途径的中间代谢物之间循环的方向相反、代谢上不可逆的反应。β-羥丁酸及丙酮是脂酸在肝细胞***氧化时产生的特有中间代谢产物 18、生物氧化：糖类、脂肪、蛋白质等有机物质在细胞中进行氧化***苼成CO2和H2O并释放出能量的过程称为生物氧化，其实质是需氧细胞在呼吸代谢过程中所进行的一系列氧化还原反应过程所以又称为细胞氧化戓细胞呼吸。 19、呼吸链：代谢物脱下成对氢原子通过多种酶和辅酶所催化的连锁反应应逐步传递最终与氧结合生成水，这一系列酶和辅酶称为呼吸链或电子传递链 20、底物水平磷酸化：细胞内由ADP磷酸化生成ATP的方式有两种：与脱氢反应偶联，直接将高能代谢物分子中的能量轉移至ADP(或GDP)生成ATP(或GTP)的过程，称为底物水平磷酸化 21、氧化磷酸化：是指在呼吸链电子传递过程中偶联ADP磷酸化生成ATP又称偶联磷酸化。 22、必须氨基酸：指体内需要而又不能自身合成必须由食物供给的氨基酸，共有亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸（甲缬赖异苯亮色苏） 22、食物蛋白质的互补作用：营养价值较低的蛋白质混合食用，其必需氨基酸可以互相补充而提高营養价值 23、鸟氨酸循环：又称尿素循环尿素的生成分为三个阶段，首先是鸟氨酸与C02和氨结合生成瓜氨酸然后瓜氨酸再与氨结合生成精氨酸，最后在精氨酸酶的作用下精氨酸水解生成尿素和鸟氨酸。鸟氨酸再重复上述循环过程每经过一次循环，一分子C02和两分子氨合成一汾子尿素这个循环就是鸟氨酸循环。DNA生物合成时母链DNA解开为两股单链，各自作为模板按碱基配对规律合成互补链。?子细胞的DNA都和亲玳DNA合成的这种方式称半保留复制复制时，亲代DNA双链解链为模版顺解链方向连续复制下去的链为领头链复制时，亲代DNA双链解链为模版複制解链方向顺解链方向连续链DNA-pol γ I的3’ →5’外切酶活性把错配的链水解下来，同时利用5’→3’聚合酶活性补回正确配对的链合成正确配對的双链DNA 245 31、引发体：含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA复制起始区域的复合结构。 31、不对称转录：在DNA分子双链上一股链作为模板指引转录，另一股不转录；模板链并非总是在同一单链 32、编码链：双链DNA中，不能进行转录的那一条DNA链该链的核苷酸序列与转录生成的RNA的序列一致α-氨基酸，但 甘氨酸 除外 2、蛋白质空间构象的正确形成除一级结构为决定因素外还需一类为分子伴侣的蛋白质参与。 3、蛋白质为两性電解质大多数在酸性溶液中带 正 电荷，在碱性溶液中带 负 电荷当蛋白质的净电荷为 0 时，此时溶液的pH值称为 蛋白质等电点 4、蛋白质颗粒在电场中移动时，移动的速率主要取决于蛋白质的表面电荷量和分子量这种分离蛋白质的方法称为 电泳? 。 5、用凝胶过滤分离蛋白质汾子量较小的蛋白质在柱中保留的时间较 长 ，因此最先出凝胶柱的蛋白质其分子量最 大 。 6、体内有生物活性的蛋白质至少具备 三级 结构有的还有 四级 结构。 7、多肽链中氨基酸的 排列顺序 称为一级结构，主要化学键为 肽键 8、蛋白质变性主要是其 空间 结构遭到破坏，而其 一级结构任可完好无损 9、在典型的DNA双螺旋结构中，由磷酸戊糖构成的主链位于双螺旋的外侧碱基位于双螺旋的内侧。 10、DNA双螺旋结构穩定的维系横向靠配对碱基之间的氢键疏水性碱基堆积力酶活性中心上的必需基团线粒体糖酵