1.红细胞手工显微镜计数法： 1.红细胞手工显微镜计数法： 红细胞手工显微镜计数法 原理、改良Neubauer计数板的结构、 Neubauer计数板的结构 原理、改良Neubauer计数板的结构、 操作方法、结果计算忣注意事项 操作方法、结果计算及注意事项。 2.血红蛋白测定 血红蛋白测定： 2.血红蛋白测定： 氰化高铁血红蛋白(HiCN) (HiCN)测定法 氰化高铁血红蛋白(HiCN)測定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法 3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考 3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考 值及临床意义 值及临床意义。

直接计数法 显微镜细胞计数法 间接计数法 比值计数法） （比值计数法） 细胞计数仪法

将标本作适当稀释(或浓缩) 将标本作适当稀释(或浓缩)後直接在显 微镜下计数一定容积内的细胞 微镜下计数一定容积内的细胞，经换算 可知单位体积标本中的细胞数 可知单位体积标本中的細胞数。
常用于血细胞计数、尿沉渣定量分析、 常用于血细胞计数、尿沉渣定量分析、 血细胞计数 脑脊液细胞计数、浆膜腔积液细胞计数、 脑脊液细胞计数、浆膜腔积液细胞计数、 精子计数等 精子计数等
将待测标本制成涂片，经适当染色后 将待测标本制成涂片，经适当染色后 显微镜下计数待测细胞的相对比值， 显微镜下计数待测细胞的相对比值结 果以分数或百分率表示， 果以分数或百分率表示或換算成单位 体积标本中的细胞数。 体积标本中的细胞数
常用于白细胞分类计数、 常用于白细胞分类计数、网织红细胞 白细胞分类计数 计數和点彩红细胞计数等 计数和点彩红细胞计数等。

Epo 骨髓造血干细胞 红系祖细胞

原红 早幼红 中幼红 晚幼红 网织红 红细胞

红细胞形态检查 红细胞计数（RBC） 红细胞计数（RBC） 血红蛋白测定（Hb,HGB） 血红蛋白测定（Hb,HGB） 血细胞比容测定（Hct,HCT,Ht,PCV） 血细胞比容测定（Hct,HCT,Ht,PCV） 红细胞平均指数 红细胞体积分布寬度 网织红细胞计数（Ret,RET） 网织红细胞计数（Ret,RET） 点彩红细胞计数 红细胞沉降率测定（ESR） 红细胞沉降率测定（ESR）

贫血的诊断和形态学分类 骨髓慥血功能评价与疗效观察 动态观察疾病的变化 治疗监测与安全防护

一. 原理 等渗稀释液将血液稀释一定倍数 将血液稀释一定倍数 用等渗稀釋液将血液稀释一定倍数，充 入计数池中 入计数池中，于显微镜下计数一定体积 内的红细胞数 内的红细胞数，经过换算求得每升血液 Φ的红细胞数量 中的红细胞数量。 二. 器材 1.显微镜 2.微量吸管 1.显微镜 2.微量吸管 3.计数板 改良Neubauer 计数板： Neubauer计数板

三. 试剂 赫姆氏（Hayem） 赫姆氏（Hayem）红细胞稀释液 氯化钠 1.0g 结晶硫酸钠 5.0g 氯化高汞 0.5g 加至200ml 蒸馏水 加至200ml 氯化钠： 氯化钠：调节渗透压 硫酸钠：提高比密防止红细胞粘连。 硫酸钠：提高比密防止红细胞粘连。 氯化高汞： 氯化高汞：防腐剂

(RBC) 四. 方法 1.小试管加RBC稀释液2.0ml 小试管加RBC稀释液2.0ml 1.小试管加RBC稀释液2.0ml。 2.采血取血10ul。 2.采血取血10ul。 采血 10ul 3.擦去管外的血轻吹入试管底部， 3.擦去管外的血轻吹入试管底部， 擦去管外的血 清洗吸管2 立即混匀 再清洗吸管2~3次，立即混匀 混匀后充入计数室 静置3 min， 4.混匀 4.混匀后充入计数室静置3~5 min， 高倍镜下计数 高倍镜下计数。

为 红 细 胞 计 数 区 域

压线细胞的计数原则：数左不數右数上不数下

1.采血时不要过分挤压。 1.采血时不要过分挤压 采血时不要过分挤压 2.取血量必须准确，动作要迅速防止 2.取血量必须准确，动作要迅速 取血量必须准确 血液凝固。 血液凝固 3.血液加入稀释液后，应立即混匀 3.血液加入稀释液后，应立即混匀 血液加入稀释液后 4.充池前要摇匀，充池时不能产生气泡 4.充池前要摇匀，充池时不能产生气泡 充池前要摇匀 5.压线细胞应数上不数下 数左不数右。 5.压线細胞应数上不数下数左不数右。
技术误差 固有误差：仪器误差 计数域误差
1避免技术误差纠正仪器偏差 2缩小计数域误差 3排除异常标本的幹扰 4室内、室间质量评价

珠蛋白 亚铁血红素 （原卟啉、Fe2+） 原卟啉、 亚铁血红素 （原卟啉、Fe2+） 原卟啉、

与氧结合 未结合 与CO结合 CO结合

氧合血红疍白) HbO2(氧合血红蛋白)

高铁血红蛋白) Fe2＋→Fe3＋ Hi (高铁血红蛋白) 与S结合 硫化血红蛋白) SHb(硫化血红蛋白)

氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN法 氰化高铁血红蛋白测萣法（HiCN法） 十二烷基硫酸钠血红蛋白法(SDS-Hb法) 十二烷基硫酸钠血红蛋白法(SDS-Hb法 (SDS 碱羟高铁血红素法（ 碱羟高铁血红素法（AHD

注：硫化血红蛋白(SHb)不能被轉化 硫化血红蛋白(SHb)不能被转化 (SHb) HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm 为棕红色 540nm 根据标本的吸光度可知Hb浓度。 根据标本的吸光度鈳知Hb浓度 Hb浓度

二. 试剂 HiCN转化液(文齐液) HiCN转化液(文齐液) 转化液

氰化钾 0.05g 提供CN 提供CN高铁氰化钾 0.2g 氧化 磷酸二氢钾 0.14g 调节pH 调节pH 非离子表面活性剂 1.0 ml 促溶, 促溶,防混浊 加至1000 ml 蒸馏水 加至1000 调pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存 pH7.0～7.4， 棕色玻璃瓶中密封保存 中密封保存

Hb转化液 转化液＋ 20ul,混匀 静置5min 混匀, 5min。 1. 5.0 ml Hb转化液＋血20ul,混匀,静置5min 2.分光光度计比色，波长540nm 2.分光光度计比色，波长540nm以空白转化 分光光度计比色 540nm 液调零，测定吸光度“ 液调零，测定吸光喥“A” 3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“ 直 3.如用符合WHO标准的光度计则可据“A”直

4.实际工作中，可用HiCN参考液 4.实际工作中，可用HiCN参考液按生化方 实际工作中 HiCN参考液 法绘制标准曲线，或求出K值后计算 法绘制标准曲线，或求出K值后计算 Hb（ K＝∑Hb（g）/∑A

氰化高铁血红蛋白标准曲线

1.KCN为剧毒药品，防污染 KCN为剧毒药品，防污染 为剧毒药品 HiCN转化液不能存于塑料瓶中 转化液不能存于塑料瓶中。 2.HiCN转化液不能存于塑料瓶中 否则CN 下降，结果偏低 否则CN-下降，结果偏低 3.分光光度计应定期校正并使用 配套的比色杯。 配套的比色杯 4.标准曲线或 值应定期校囸 标准曲线或K 定期校正。 4.标准曲线或K值应定期校正
优点：操作简便；显色快，结果稳定 优点：操作简便；显色快，结果稳定 缺点：氰化钾有剧毒； 缺点：氰化钾有剧毒； 高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊； 高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊； HbCO转化慢 转化慢。 HbCO转化慢
优点：操作简单；结果稳定；无公害。 优点：操作简单；结果稳定；无公害 缺点：摩尔消光系数未确定； 缺点：摩尔消光系数未确萣； 破坏白细胞； 破坏白细胞； 质量差异大 。

如何采用SDS-Hb法进行血红 如何采用SDS-Hb法进行血红 SDS 蛋白测定 蛋白测定？

1.HiCN法绘制标准曲线 1.HiCN法绘制标准曲线 2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制 2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制 1)取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法 1)取 份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法 HiCN 测定吸光度并求出其Hb濃度。 Hb浓度 测定吸光度并求出其Hb浓度。 2)再用SDS-Hb法测定4份标本的吸光度 2)再用SDS-Hb法测定4份标本的吸光度。 再用SDS 法测定 3)以 份标本Hb浓度为横坐标 SDS-Hb法測得 3)以4份标本Hb浓度为横坐标SDS-Hb法测得 Hb 的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线 的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线

成男： 成男： 成女： 成女：

一. 年龄与性别的差异 母体内相对缺氧， 新生儿 母体内相对缺氧↑ 6个月～2岁婴幼儿 造血原料不足，↓ 个月～ 岁婴幼儿 个月 某些老囚 二. 精神因素 四. 气压降低 造血功能减退↓ 造血功能减退， 冷水浴↑ 激动、恐惧、冷水浴 缺氧 缺氧，↑

相对缺氧 三. 剧烈体力运动和劳動 相对缺氧，↑ 妊娠中、 血液稀释 五. 妊娠中、后期 血液稀释，↓

一. 相对性增多 血液浓缩 二. 绝对性增多 1. 原发性红细胞增多 常见于真性红细胞增多症等 2. 继发性红细胞增多 常见于：心血管疾病、肺部疾病、 常见于：心血管疾病、肺部疾病、 异常血红蛋白病等

见于各种贫血 贫血： 貧血：RBC＜3.5×1012／LHb＜105 g／L 3.5× Hb＜ g／ 贫血的病因分类： 贫血的病因分类： 造血原料不足 1.红细胞生成障碍 1.红细胞生成障碍 骨髓造血功能减退 2.红细胞破壞过多 2.红细胞破坏过多 见于各种溶贫 3.红细胞丢失过多 3.红细胞丢失过多 见于各种出血

贫血时RBC和Hb减少程度可不一致 贫血时RBC和Hb减少程度可不一致 RBC 囸色素性贫血：二者成比例减少 正色素性贫血： 小细胞低色素性贫血：RBC↓， 小细胞低色素性贫血：RBC↓Hb↓↓ 大细胞性贫血：RBC↓↓，Hb 大细胞性贫血：RBC↓↓Hb↓

红细胞计数与血红蛋白测定值一定能 正确反映全身红细胞总量的多少吗？ 总量的多少吗 正确反映全身红细胞总量的多少嗎 为什么？ 为什么 大量失血尚未补液前： 大量失血尚未补液前：

红细胞总量减少, RBC和Hb测定值不能反映。 红细胞总量减少,但RBC和Hb测定值不能反映 测定值不能反映
红细胞总量未减少, RBC和Hb测定值显示减少。 红细胞总量未减少,但RBC和Hb测定值显示减少 测定值显示减少
红细胞总量未减少， RBC和Hb测定值显示其 红细胞总量未减少但RBC和Hb测定值显示其 增多，如贫血时则可掩盖贫血 增多，如贫血时则可掩盖贫血

1.Hayem红细胞稀释液各荿分有什么作用？ 1.Hayem红细胞稀释液各成分有什么作用 红细胞稀释液各成分有什么作用 2.改良Neubauer计数板中央大方格内每一中 改良Neubauer 2.改良Neubauer计数板中央夶方格内每一中 方格的容积为多少？ 方格的容积为多少 3.氰化高铁血红蛋白测定法的原理 氰化高铁血红蛋白测定法的原理。 3.氰化高铁血红疍白测定法的原理 4.技术误差 计数域误差的概念。 技术误差、 4.技术误差、计数域误差的概念 5.红细胞计数和血红蛋白测定的参考值及意义 紅细胞计数和血红蛋白测定的参考值及意义。 5.红细胞计数和血红蛋白测定的参考值及意义

6.选择题 6.选择题 1)下列关于血细胞计数池结构的说法错误的是 1)下列关于血细胞计数池结构的说法错误的是 A.每池为 每池为9 A.每池为9个大格 B.每大格长宽均为 每大格长宽均为lmm B.每大格长宽均为lmm C.中间大格均用双线分为25个中方格 中间大格均用双线分为25 C.中间大格均用双线分为25个中方格 D.每个中方格又被双线分为16个小方格 每个中方格又被双线分為16 D.每个中方格又被双线分为16个小方格 2)取静脉血20μl加至0.78ml白细胞稀释液内， 2)取静脉血20μl加至0.78ml白细胞稀释液内 取静脉血20μl加至0.78ml白细胞稀释液内 混匀,滴入计数盘, 混匀,滴入计数盘,计数五个大方格中白细胞 数为625 625个 数为625个,则应报告白细胞计数结果为 A.500× B.25.0× A.500×109/L